探究银杏叶提取物对肺纤维化模型大鼠肺组织mmp

《探究银杏叶提取物对肺纤维化模型大鼠肺组织mmp》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、探究银杏叶提取物对肺纤维化模型大鼠肺组织MMP研究[1]认为，肺间质纤维化的发生、发展是胶原蛋白等细胞外基质(ECM)合成与降解不平衡的结果，在ECM降解中，基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase，MMP)起非常重要的作用。近年来研究发现，肺泡上皮基底膜的完整对保证肺组织结构正常修复起着至关重要的作用。肺泡上皮基底膜是一种特殊的ECM形式，Ⅳ型胶原是其重要组成成分，以Ⅳ型胶原为作用底物的MMPs主要有2种，分别是MMP-9和MMP-2，其中MMP-9的作用我们已经进行了研究，本实验主要以MMP-2为研究指标，采用逆转录-

2、聚合酶链反应(RT-PCR)，观察博莱霉素所诱导的大鼠肺纤维化不同时间点MMP-2mRNA的动态变化，以及银杏叶提取物对MMP-2mRNA表达的影响，探讨MMP-2在博莱霉素所诱导的大鼠肺纤维化的发生、发展中的作用以及银杏叶提取物的治疗效应。报告如下。　　1材料　　1.1实验药物　　博莱霉素(平阳霉素，BleomycinA5，BLMA5;天津太河制药有限公司生产，批号040601)，每支8mg，用1mL生理盐水配置备用。醋酸强的松片(广东华南制药厂生产，批号041201)，在使用时用蒸馏水溶解，配成0.32g/L混悬液备用。银杏叶提取物选用依康

3、宁片(扬子江集团有限公司生产，批号05012801，每粒含总黄酮醇苷19.2mg，萜类内酯4.8mg，剂量按照总黄酮醇苷与萜类内酯总剂量计算)，用蒸馏水溶解制成0.675g/L混悬液备用。　　1.2主要试剂及仪器　　氯仿(天津市博迪化工有限公司)，DEPC、无水乙醇及异丙醇(上海振兴化工厂)，Trizol(购自Gibco公司)，反转录及PCR试剂盒购自Takata公司，Marker，上样缓冲液LoadingBuffer，琼脂糖，溴乙锭。　　PCR扩增仪、高速低温离心机、电泳仪、5mL匀浆器、微量移液器、液氮、-70℃冰箱、UVP-GDS8000

4、凝胶成像分析系统(Ultra-Violet，美国)。　　MMP-2引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，产物大小为400bp，上游引物5CACCATCGCCCATCATCAAGT3，下游引物5TGGATTCGAGAAAAGCGCAGCGG3;内参照GAPDH，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，产物大小为450bp，上游引物5ACCACAGTCCATGCCATCA3，下游引物5TCCCACCACCCTGTTGCTGT3。　　2方法　　2.1实验动物及分组　　96只健康)建立大鼠肺纤维化模型。10%的水合氯醛10mg/(kgbL/(kg

5、bg/(kgbL/kgbg/kg)灌胃1次;A、B组每天用生理盐水(10mL/kgbg置于EP管中，然后将EP管迅速置于液氮中。　　2.5检测方法　　第1步:抽提RNA。　　第2步:逆转录(reversetranscriptase，RT)　　(1)RT第1步，反应体系8Μl65℃15min，然后立即放入冰浴;　　(2)RT第2步，在第1步基础上续加以下试剂，反应体系20μL37℃1h，94℃5min，反应物作为cDNA模板进行PCR。　　第3步:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，PCR)。以RT反应的产

6、物作为CDNA模板，反应体系25μL94℃45s，56℃50s，72℃90s30个循环;72℃10min;取出后4℃5min后电泳。　　第4步:电泳。　　2.6图像分析　　电泳条带采用UVP-GDS8000凝胶成像系统(ElectrophoresisDocumentationandAnalysisSystem，USA)做积分光密度(IOD)测定，并分别以各组目的基因与内参GAPDH的IOD比值来衡量各时间点MMP-2mRNA表达的相对含量。　　2.7统计学方法　　采用PEMS3.1统计软件进行数据处理，计量资料用均数±标准差

7、(珋x±s)表示，组间比较用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。　　3结果　　大鼠肺组织MMP-2mRNA动态变化的相对定量结果显示，各实验组在第7、14、28天3个时间点均有MMP-2mRNA的表达，与A组相比，B组第7天含量显著升高(P<0.01)，第14天时达到高峰，第28天虽较第7、14天时有所降低，但仍明显高于A组同期(P<0.01)。与B组比较，C组和D组各时间点含量均明显降低(P<0.01)。　　4讨论　　肺间质纤维化的发病率逐年上升，但由于其发病机制尚未阐明，治疗效果不尽人意。近年来，

8、众多学者越来越重视对ECM降解的研究，认为肺间质纤维化是ECM合成与降解不平衡的结果，其中MMPs起着十分重要的作用。根据降解的底物不同，MMPs可分