il-17a对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究

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1、中图分类号：R563.9硕士学位论文IL-17A对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究院（系）、所临床医学院研究生姓名马艳梅学科、专业内科学导师姓名范贤明教授基金资助项目：泸州市科技局资助项目（2012-S-37）二Ο一三年四月目录1IL-17A对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究……………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言……………………………………………………………71.4材料与方法……………………………………………………10

2、1.5结果……………………………………………………………201.6讨论……………………………………………………………341.7结论……………………………………………………………401.8参考文献………………………………………………………411.9英汉缩略词对照表……………………………………………472致谢……………………………………………………………483肺纤维化中IL-17A的研究进展（综述）…………………49IL-17A对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究摘要目的：通过观察经博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织和肺泡巨

3、噬细胞（Alveolarmacrophage，AM）中IL-17A的表达，探讨IL-17A在肺纤维化发病机制中的作用和意义。方法：1.取20只Wistar雌性大鼠（体重为180~200g）随机分为生理盐水对照组（NS组）和博莱霉素致肺纤维化模型实验组（BLM组），每组10只；2.BLM组：气管内一次性注入经生理盐水稀释的博莱霉素溶液0.2ml（5mg/kg体重，BLM溶液浓度为5mg/ml），用以诱导大鼠复制肺纤维化模型；NS组：气管内一次性注入0.2ml生理盐水（1ml／kg体重）；3.然后各组分别于气管内灌注后第

4、7天和第28天各随机处死大鼠5只，无菌操作下行支气管肺泡灌洗，回收支气管肺泡灌洗液（BronchialAlveolarLavageFluid，BALF），取出肺组织，病理学方法观察各阶段肺内炎症和纤维化程度，免疫组化检测肺组织IL-17A表达。收集BALF分为两组，一组用作细胞总、分数测定，以及用酶联免疫吸附实验法（ELISA法）测定BALF中TNF-、IL-17A的含量；一组用作AM的分离与纯化、培养，培养上清液用ELISA法测定IL-17A的含量，提取AM总RNA后用逆转录-聚合酶链反应（ReverseTran

5、scription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR）测定肺泡巨噬细胞IL-17A的mRNA表达。结果：1.肺组织病理切片观察：NS组第7天及第28天均无肺泡炎及肺纤维化表现，肺组织结构正常；BLM组第7天时主要表现为肺泡炎，BLM组第28天时主要表现为肺纤维化，但肺泡炎仍存在；2.BALF细胞总、分数的测定结果分析：NS组BALF细胞总数无明显变化，而BLM组BALF细胞总数第7天明显增高，与NS组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，第28天BALF1细胞总数恢复至正常水平，与NS组

6、比较，差异无统计学意义(P>0.05)；3.肺泡炎和肺纤维化分级计分的定量分析：NS组各时间点均未表现肺泡炎及肺纤维化。BLM组肺泡炎程度在第7天表现显著，与NS组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，第28天时肺泡炎仍存在，但程度明显减轻，与NS组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。BLM组肺纤维化程度在第7天表现中度，在第28天表现显著，与NS组比较肺纤维化均加重，差异有统计学意义(P<0.05)。4.免疫组化肺组织IL-17A蛋白的分析：NS组大鼠肺组织中IL-17A表达弱，第7天及第28天均无明显变化，

7、而BLM组第7天及第28天IL-17A表达较NS组比较明显增强，差异均有统计学意义（P<0.05），第28天表达较第7天有所降低。5.ELISA检测BALF中TNF-、IL-17A显示NS组大鼠BALF中的TNF-、IL-17A含量无明显变化，而BLM组第7天及第28天TNF-、IL-17A含量明显增高，与NS组比较，差异有显著统计学意义(P<0.01)，但第28天时TNF-、IL-17A含量较第7天降低。6.ELISA检测AM培养上清液中IL-17A显示NS组7天、28天AM各时期培养中呈弱表达，各时期之间

8、相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；BLM组7天、28天AM培养第12小时、第24小时、第48小时上清液中IL-17A的表达与NS组比较均明显增高，差异显著有统计学意义（P<0.01）。7.RT-PCR检测显示IL-17A在NS组AM各时期培养中有微弱表达，各时期之间相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；BLM组7天、28天各时期的表