肺纤维化形成中大鼠肺内肥大细胞结缔组织生长因子表达的变化及其机制初探

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1、河北医科大学硕士学位论文肺纤维化形成中大鼠肺内肥大细胞结缔组织生长因子表达的变化及其机制初探姓名：牛学敏申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：陈晓玲201203中文摘要肺纤维化形成中大鼠肺内肥大细胞结缔组织生长因子表达的变化及其机制初探摘要目的：肺纤维化(pulmonaryfibrosis，PF)是以肺成纤维细胞大量增殖和肺内胶原异常堆积为特征的进行性间质性肺疾病。研究发现，在博莱霉素(bleomycin，BLM)诱导的大鼠肺纤维化形成过程中，大鼠肺内肥大细胞(mastcells，MCs)数目增多。本课题组以往研究发现，大鼠气管内滴注BLM

2、第14天和第28天肺内MCs增多，在肺连续切片上发现MCs分泌结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)。但此发现尚需进一步证实。迄今MCs分泌CTGF的机制尚不清楚。类胰蛋白酶是MCs的特异性标志物。本实验首先用类胰蛋白酶免疫显色方法证实肺纤维化形成过程中肺内MCs数量的增多；并用免疫荧光双标的方法证实MCs表达CTGF；在此基础上，通过观察氨基胍(aminoguanidine，AG)和黄芩苷(Baicalin，Bai)对肺纤维化形成过程中大鼠肺内MCs数量以及表达CTGF的影响，以期阐明肺纤维化形成过程中肺

3、内MCs数量增多的机制以及MCs表达CTGF的机制。方法：免疫组化方法检测MCs的数量；免疫荧光双标的方法验证MCs表达CTGF；用HE染色观察肺组织形态学变化。将52只健康清洁级Sprague．Dawley(SD)(6)(体重170．180g)大鼠随机分成三组：1．动态观察组(n=8)：分两个时间点即14d和28d大鼠于气管内一次性滴注BLM(5mg／kg)或NS(O．5ml／kg)后第15d和29d被处死取肺。2．早期给药组(即1．14d给药组)(n=21)：14dNS+14dNS大鼠(n=3)于气管内一次性滴注NS(O．5ml／kg)后，每天腹腔注

4、射NS(1ml／kg)，连续14d；14dM+14dNS大鼠(n-8)于气管内一次性滴注BLM(5mg／kg)后，每天腹腔注射NS(1ml／kg)，连续14d；14dM+14dBai大鼠(n．5)于气管内一次性滴注BLM(5mg／kg)后，每天腹腔注射Bai(12．5mg／kg)，连续14d；14dM+14dAG大鼠(n=5)于气管内一次性滴注BLM(5mg／kg)后，每天腹腔注射AG(20mg／kg)，连续14d。此组大鼠于第15d取肺。3．晚期给药组(即14．28d给药)(n=23)：28dNS+后中文摘要14dNS大鼠(n-3)于气管内一次性滴注N

5、S(0．5ml／kg)后第14d至28d期间，每天腹腔注射NS(1ml／kg)；28dM+后14dNS大鼠(n_8)于气管内一次性滴注BLM(5mg／kg)后第14d至28d期间，每天腹腔注射NS(1ml／kg)；28dM+后14dBai大鼠(n=6)于气管内一次性滴注BLM(5mg／kg)后第14d至28d期间，每天腹腔注射Bai(12．5mg／kg)；28dM+后14dAG大鼠(n_6)于气管内一次性滴注BLM(5mg／kg)后第14d至28d期间，每天腹腔注射AG(20mg／kg)。此组大鼠于第29d取肺。以上各组大鼠均在规定的时间点取肺，肺组织用

6、于检测MCs及CTGF免疫阳性的MCs数量和形态学观察。采用人工计数法，每张免疫组化切片随机选取5个高倍不重叠视野准确计数MCs，每只大鼠计数肺组织不同部位3张切片计算MCs的平均值。每张免疫荧光组化切片随机选取3个低倍不重叠视野准确计数MCs及CTGF免疫阳性的MCs数量，每只大鼠计数肺组织不同部位3张切片计算MCs及CTGF免疫阳性的MCs数量的平均值。所有数据均用均数4-标准差(i士SD)表示，采用SPSSl3．0统计软件，多个样本均数比较用单因素方差分析(One．wayANOVA)，多个样本均数间的两两比较用最小显著差法(Leastsignifi

7、cantdifference，LSD)，以P<0．05为有显著性差异。结果：l肺纤维化形成中肺内MCs及CTGF免疫阳性的MCs数量的变化1．1MCs数量的动态变化：免疫组化和免疫荧光显色结果显示：与对照组大鼠相比，BLM大鼠肺内类胰蛋白酶免疫阳性染色的MCs数量第14天和第28天增多(氏O．01，P<0．001)。与14dM大鼠相比，28dM大鼠肺内类胰蛋白酶免疫阳性染色的MCs数量的变化无统计学意义胗O．05)。1．2类胰蛋白酶与CTGF共存的MCs数量的动态变化：与对照组大鼠相比，BLM大鼠肺内类胰蛋白酶与CTGF共存的MCs数量在第14天和第28

8、天增多(氏O．001)。与14dM大鼠相比，28dM大鼠肺内类胰蛋白酶与CTGF