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1、脂多糖对人工关节磨屑诱导的骨溶解的影响：段钢朱自强陈宏亮戈兵【摘要】目的探讨脂多糖(LPS)促进人工关节松动的可能性。方法采集30例人体外周血,分离单核细胞(MOs)，分组培养。实验分4组（n=30）：A组(对照组)仅加入MOs;B组加入MOs+LPS（100μg/L），C组加入MOs+超高分子聚乙烯微粒(UHMOs+UHMOs分泌TNF-α、IL-6，效果与UHMethods30samplesofperipheralbloodhealthyhumandonors.Monocytes(MOs)ole
2、cularmunoassay.ResultsThelevelsofTNF-αandIL-6uchhigheringroupDthanintheother3groups.ThereulatesMOstosecreteTNF-αandIL-6.LPSisnotonlysimilartoUHMI1640细胞培养液(GBCO公司),聚蔗糖-泛影葡胺分层液(FICOLL,上海试剂厂，沪Q/HG22222043289),小牛血清(特级,杭州四季青公司),六孔培养板(GBCO公司),TNF-αELISA试剂盒(解
3、放军总医院科技开发中心放免研究所,最小检测浓度＜0.3μg/L),IL-6ELISA试剂盒(RD公司)。 1.2样本采集 随机选择健康献血者30例,其中男18例,女12例,年龄40～70岁,平均52.6岁。每例受试者采集外周血10ml,肝素抗凝。 1.3实验方法和分组 采集的外周血以Hank液稀释1倍,分层液梯度离心法分离出MOs。洗涤3次,加含10%小牛血清的RPMI1640培养液制成细胞悬液,细胞计数,调整细胞浓度至4×108/L,锥虫蓝排除法检测细胞活力均大于95%。向培养板中滴加细胞
4、悬液,每孔加3ml。置37℃、5%CO2恒温恒湿培养箱培养4h,使细胞贴壁,利用MOs的贴壁性洗去非贴壁细胞,留下MOs。每板第1孔加入含10%小牛血清的RPMI1640培养液3ml,于第2孔中加入100μg/L的LPS悬液3ml,余2孔中加入浓度为1012/L的UHMOs的空白对照组(A组),第2孔为MOs+LPS100μg/L(B组),第3孔为MOs+UHMOs+UHMOs分泌TNF-α、IL-6，效果相似；D组TNF-α、IL-6含量均明显高于B、C组(P＜0.05)，说明LPS具有促进UHM
5、Os分泌TNF-α、IL-6的作用，增强了溶骨效应。表1不同处理组TNF-α、IL-6的含量(略) 3讨论人工关节置换术是治疗严重关节疾患的有效方法之一。但是，随着人工关节置换数量的增加以及人工关节使用年限的延长，人工关节的无菌性松动成为影响其远期疗效的主要原因。超过66%的髋关节翻修和近50%的膝关节翻修由人工关节无菌性松动引起［4］。目前多数研究认为各种磨损碎屑活化假体周围界膜中的巨噬细胞、异物巨细胞等细胞释放IL-6、IL-1及TNF-α等骨吸收因子，溶骨性因子直接或间接地激活破骨细胞，从而
6、引起假体周围骨吸收、骨溶解，后者又可加重磨损，产生更多的微粒，形成恶性循环，使假体周围支撑骨量丢失，最终导致人工关节的无菌性松动。 在生物性因素方面,磨损颗粒是无菌性松动发生的关键性因素［2］。然而，随着对无菌性松动的生物学机制研究的逐渐深入,LPS在加速人工关节的无菌性松动方面的作用逐渐引起重视。LPS是革兰阴性细菌所共有的细胞膜成分，具有与磨损颗粒相似的生物学作用，可刺激细胞产生TNF-α、IL-1、IL-6［5］，这些因子正是导致了人工关节无菌性松动的主要原因,并且LPS易黏附于多种人工假体
7、材料及其磨损颗粒，如钛、钛合金、聚乙烯等［3，6～8］。Tatro等［9］发现在UHMOs、UHMOs分泌溶骨因子TNF-α、IL-6；B、C组之间TNF-α和IL-6含量差异无统计学意义(P＞0.05)，提示在一定的剂量范围内LPS刺激MOs分泌溶骨性因子TNF-α、IL-6的作用与UHMOs分泌TNF-α、IL-6的作用，二者具有协同作用，增强了溶骨效应。本实验结果亦提示LPS具有促进UHMJ,HastyKA,etal.AccumulationofLPSbypolyethyleneparticl
8、esdecreasesboneattachmenttoimplants［J］.JOrthopRes,2006,24(5):959-996. ［4］SundfeldtM,CarlssonLV,JohanssonCB,etal.Asepticloosening,notonlyaquestionofSJ,etal.LipopolysaccharidefromPrevotellanigrescensstimulatesosteoclastogenesisincocultur
