依那西普对磨屑诱导骨溶解影响的实验研究

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1、依那西普对磨屑诱导骨溶解影响的实验研究陈志荣，张亮，吴兴临，陆志东，金群华【摘要】［目的］检测依那西普(Etanercept，Enbrel)对钛颗粒刺激巨噬细胞(macrophages，MΦ)分泌肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、白介素1(interleukin-1,IL-1)、白介素6(interleukin-6,IL-6)的影响，探讨依那西普防治人工关节无菌性松动的可能性。［方法］分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞，24h后分为5组。A组：仅为MΦ；B组：MΦ+钛颗粒

2、；C组：MΦ+钛颗粒+依那西普(10ng／ml)；D组：MΦ+钛颗粒+依那西普(100ng／ml);E组：MΦ+钛颗粒+依那西普(1000ng／ml)。培养18h后，用酶联免疫法(ELISA)检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1、IL-6的含量。［结果］B组TNF-α、IL-1、IL-6含量明显高于A、D、E组(P<0.001)，E组TNF-α、IL-1、IL-6的含量明显低于B组、C组(P<0.00１，E组和D组间无统计学意义(P>0.05)。［结论］钛颗粒可以刺激MΦ分泌大量的

3、TNF-α、IL-1、IL-6，依那西普能够呈剂量依赖型地有效抑制钛颗粒诱导的MΦ分泌TNF-α、IL-1、IL-6，有望成为预防人工关节无菌性松动的药物。【关键词】依那西普；磨屑；骨溶解Abstract：［Objective］TodetecttheeffectofEtanerceptontheTiparticlesinducedTNF-αIL-１andIL-6productionbymacrophageandtoevaluatethevalidityoftheetanerceptontreatment

4、ofasepticlooseningofprosthesis.［Method］SeparateandCultivatemouseperitonealmacrophagesl),groupDl),groupEl).After18h,theproductionofTNF-αIL-1andIL-6inculturesupernatantsuchhigheringroupBthanthoseingroupA,D,E(P<0.001).Thelevelsof　TNF-αIL-1andIL-6producti

5、onuchloulateMΦtoexcreteprofuseTNF-ΑIL-１andIL-6production,etanerceptcansignificantlyinhibitedtheproductionofTNF-αIL-1andIL-6secretedbyTiparticlesinducedmacrophagesinadose-dependentmannerandhopetobeatherapeuticcandidateforthepreventionofasepticloosening.Ke

6、ygenand-MER公司提供，微粒直径为3～5μm)，RPMI1640细胞培养液(GIBCO)，小牛血清(特级，杭州四季青)，24孔培养板(COSTA)，CO2细胞培养箱(LB-7,东京池本理化工业株式会社制造)，倒置显微镜及照相系统(Olympus,LX-50)，肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒(R＆B，最小检测浓度<8pg／ml)，白介素1(IL-1)ELISA试剂盒(R＆B，最小检测浓度<8pg／ml)，白介素6(IL-6)ELISA试剂盒(R＆B，最小检测浓度<8

7、pg／ml)。1.3小鼠腹腔巨噬细胞的分离、培养［2］脱颈处死6～8周龄BALB／C小鼠，75％酒精浸泡5min后，倒立小鼠并腹腔注入无血清RPMI1640培养液5ml,仰卧平放并轻揉小鼠腹部2～3min,静置3～5min后，无菌条件下打开小鼠腹腔，用注射器抽取腹腔液约4～5ml。离心洗涤后显微镜下计数，常规10％RPMI1640培养液(含10％胎牛血清，青霉素100u／ml,链霉素100μg／ml)调整细胞至3×106／ml，胎盘蓝排除法检测细胞活力均＞95％。在2块24孔培养板内滴加细胞悬液，每孔1

8、ml，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，12h后换液，以去掉未贴壁的细胞，继续培养供实验用。1.4酶联免疫法(ELISA)检测MΦ分泌细胞因子的量24h后将培养细胞分为5组，每组有8个平行孔：A组为单纯细胞组；B组为细胞+1×109／ml钛颗粒组，C组为细胞+1×109／ml钛颗粒+10ng／ml依那西普；D组为细胞+1×109／ml钛颗粒+100ng／ml依那西普；E组为细胞+1×109／ml钛颗粒+1000ng／ml依那西普。将上述细