泼尼松龙对脂多糖诱导的RANTES的影响.doc

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1、泼尼松龙对脂多糖诱导的RANTES的影响作者：朴花子，张成镐，方宇辉【关键词】泼尼松龙；小胶质细胞；RANTES；脂多糖　　摘要：目的探讨泼尼松龙对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞激活时所分泌的趋化因子RANTES的影响。方法采用MEM培养液培养小胶质细胞，培养液中添加不同质量浓度的LPS(0、100、500、1000μg/L)及LPS(100μg/L)与10μmol/L的泼尼松龙后再培养12h，用ELISA法测定细胞外液所分泌的RANTES含量。结果LPS能高度激活小胶质细胞并且能使RANTES

2、分泌增加，泼尼松龙明显抑制RANTES的含量。结论泼尼松龙有抑制趋化因子RANTES的分泌作用。　　关键词：泼尼松龙；小胶质细胞；RANTES；脂多糖　　EffectofprednisoloneonLPSinducedRANTESproductionPiaoHuazi,ZhangChenggao,FangYuhui　　KEYWORDS:prodnisolone;microglia;RANTES;lipopolysaccharide　　小胶质细胞作为中枢神经系统的一种组织巨噬细胞，在中枢神经系统疾病

3、中起重要作用[12]。研究显示，静息状态的小胶质细胞缺乏巨噬细胞样功能，但大脑受损伤时可激活小胶质细胞，一方面可通过与神经细胞直接接触，发挥脑内吞噬细胞的毒性作用；另一方面是分泌的一些炎症介质如一氧化氮(nitricoxide,NO)、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactoralpha,TNFα)、白细胞介素1(interleukin1,IL1)、趋化因子monocytechemotacticprotein1(MCP1)和regulateduponactivationnormalTce

4、llexpressedandsecreted(RANTES)等，导致继发性脑损伤。趋化因子是一类对白细胞游走和活化具有重要作用的蛋白超家族，除了具有对T细胞的募集功能外，还能参与调控多种生物过程，如细胞黏附、吞噬、细胞因子产生、T细胞激活、血管生成与增殖等[34]。在各种原因所致的脑损伤过程中，趋化因子分泌增加，使炎症反应不断放大，会进一步加重脑损伤[5]。糖皮质激素类由于具有抗炎、稳定细胞膜的作用，多年来一直被作为重型颅脑损伤的重要辅助治疗药物之一[6]。泼尼松龙属于中效肾上腺皮质激素类药，主要

5、用于严重的细菌感染和严重的过敏性疾病、各种血小板减少性紫癜、粒细胞减少症、严重皮肤病、器官移植的免疫排斥反应、肿瘤的治疗及对糖皮质激素敏感的眼部炎症等。本文研究了泼尼松龙对小胶质细胞被脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活时所分泌的趋化因子RANTES的影响。　　1材料与方法　　1.1实验试剂泼尼松龙和LPS为美国Sigma公司产品，细胞培养液用的MEM(minimumessentialmedium)为美国GibcoBRL公司产品，RANTESELISA试剂盒为美国R&

6、DSystems公司产品。4　　1.2方法取10只新生小鼠(1-2d龄)，在无菌条件下，剪开颅骨，取出脑组织[7]。分离后的细胞用100mL/L热灭活胎牛血清的MEM培养液培养10d后使用。细胞接种于48孔培养板(3.5×105细胞/mL，0.2mL/孔)中12h后进行实验。实验可分为空白对照组(正常细胞)、LPS处理组(在培养液中加入100μg/L的LPS)、泼尼松龙组(在培养液中加入10μmol/L的泼尼松龙)、试药组(LPS+泼尼松龙)，并继续培养12h后，用相应的ELISA试剂盒来测定趋化

7、因子RANTES含量。　　1.3统计学处理实验各项数据用均数±标准差表示，采用t检验进行统计学处理分析。P<0.01被认为有统计学意义。　　2结果　　2.1LPS对小胶质细胞分泌RANTES含量的影响如图1所示，LPS能高度激活小胶质细胞并且能使RANTES分泌增加。在MEM培养液中培养小胶质细胞，培养液中添加不同质量浓度的LPS(0、100、500、1000μg/L)，用ELISA法测定细胞外液所分泌的RANTES的含量。LPS处理后6h时细胞培养液中RANTES含量较空白对照组有明显增高

8、，呈时间依赖性(图1)。　　图1LPS对小胶质细胞分泌RANTES含量的影响（略）　　Fig.1LPSinducedRANTESproductioninmicroglia　　A:CulturedmicrogliawereincubatedwithindicatedconcentrationsofLPSfor12h;B:TheculturemediumwasaddedwithLPS(100μg/L)andthemicrogliawereincubatedfor3,6,12and24h