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1、汉黄芩素对脂多糖诱导的促炎性因子的影响【关键词】汉黄芩素；小胶质细胞；脂多糖；一氧化氮；肿瘤坏死因子-α；白细胞介素-6 ABSTRACT:ObjectiveToobservetheeffectsofmatorycytokineproductioninactivatedmicroglia.MethodsByusingLPS-inducedmicrogliaactivationmodel,nitricoxide(NO),tumornecrosisfactor-alpha(TNF-α)andinterleu
2、kin-6(IL-6)secretedbyextracellularfluideasuredbyELISA.ResultsMicrogliamarkedlyproducedNO,TNF-αandIL-6inresponsetoLPS.EM(minimumessentialmedium)为美国GibcoBRL公司产品，ELISA试剂盒为美国RDSystems公司产品。汉黄芩素由韩国大熊制药公司提供。 1.2实验分组及处理 取10只新生小鼠(1-2d龄)，在无菌条件下，剪开颅骨，取出脑组织［6］。分离后的
3、细胞用含100mL/L热灭活胎牛血清的MEM培养液培养10d后使用。细胞接种于48孔培养板(3.5×105细胞/mL，0.2mL/孔)中12h后进行实验。实验分为空白对照组(正常细胞)、LPS处理组(在培养液中加入100μg/L的LPS)、汉黄芩素组(在培养液中加入10、20、30μmol/L的汉黄芩素)和试药组(LPS+10、20、30μmol/L汉黄芩素)，并继续培养相应的时间后，采取培养液分别用Greiss试剂和ELISA试剂盒来测定NO、TNF-α和IL-6的含量。 1.3统计学处理 实验各项
4、数据均用均数±标准差表示，用SPSS10.0统计软件进行统计。组间差异比较用单因素方差分析，P<0.05被认为差异有统计学意义。 2.2汉黄芩素对LPS诱导的TNF-α生成的影响 在正常情况下小胶质细胞几乎不分泌TNF-α，而LPS可激活小胶质细胞分泌大量的TNF-α。LPS处理后3h时细胞培养液中TNF-α含量开始增高，6h时达到高峰，含量较空白对照组高达14倍。而汉黄芩素10、20、30μmol/L可明显抑制TNF-α分泌，与LPS组比较，差异具有统计学意义(P<0.05，图2)。
5、2.3汉黄芩素对LPS诱导的IL-6生成的影响 图3显示，LPS可激活小胶质细胞分泌大量的IL-6，LPS处理后6h时细胞培养液中IL-6含量开始增高，12h时含量较空白对照组高达13倍多。而汉黄芩素20、30μmol/L可明显抑制IL-6分泌，与LPS组比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。 3讨论小胶质细胞参与中枢神经系统的各种生理和病理过程。脑缺血后，反应性小胶质细胞一方面转化为吞噬细胞，通过吞噬死亡神经细胞残骸和变性的突触，有利于神经元再生和死亡周边区神经元的存活；同时通过释放和分泌
6、一系列的神经毒性物质和炎性因子，如氧自由基、NO、超氧化物、TNF-α、IL-1β和趋化蛋白MCP-1、RANTES等，导致继发性脑损伤。中枢神经系统的炎症反应与神经退行性疾病,如Alzheimer症、多发性硬化、AIDS性痴呆、肌萎缩性脊髓侧索硬化及创伤后脑缺血损伤的发生密切相关。在这些疾病发生过程中，大脑的免疫细胞-小胶质细胞发挥重要作用。黄芩是传统的中药，始载于《神经本草经》。黄芩的活性成份主要为黄芩素(baicalein)、黄芩苷(baicalin)、汉黄芩素(ageinprimarycultur
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