虾青素对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用

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1、虾青素对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用【摘要】目的研究虾青素对脂多糖（LPS）所致急性肺损伤（ALI）小鼠的保护作用。方法雄性昆明种小鼠60只，随机分为正常对照组、急性肺损伤模型组、地塞米松阳性对照组(5mg/kg)以及虾青素低、中、高剂量组(10、15、20mg/kg)共6组。不同剂量虾青素给大鼠连续灌胃30d后，腹腔注射脂多糖6.0mg/kg建立ALI模型。在注射后6h，收集腹主动脉血并进行左侧支气管肺泡原位灌洗以收集灌洗液，测定血中淋巴细胞亚群（CD+3、CD+4、CD+8）、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素8(IL8)及丙二醛（MDA）、超氧化

2、物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性；测定各组的肺湿重/干重比、肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)含量及肺组织匀浆TNFα、白细胞介素10(IL10)含量。结果虾青素各剂量组均能降低因LPS诱发的血TNFα、IL8、MPO、MDA含量与肺组织湿重/干重比的升高，同时抑制肺组织IL10含量、血SOD与GSHPx活性的降低，改善血中淋巴细胞亚群分布。结论虾青素对LPS所致ALI具有预防性保护作用。【关键词】虾青素；急性肺损伤；脂多糖【Abstract】ObjectiveTostudytheprotectiveeffectofasta

3、xanthinonacutelunginjury(ALI)inducedbylipopolysaccharide（LPS）inmiceandresearchitspossiblemechanisms.Methods60maleKunmingmicelydividedintocontrol,ALI,dexamethasone(DXM,5mg/kg)andloiddle,highdifferentdoseastaxanthin(10,15,20mg/kg)groups.Afterlavagedfor30days,controlgroupg/kg)toinduceALIm

4、odels.Afterinjectedsixhours,thecontentsofserumlymphocytesubpopulations(CD3+,CD4+,CD8+),tumournecrosisfactor(TNF)α,interleukin(IL)8,malondialdehyde(MDA),superoxidedismutase(SOD)andtheactivityofglutathioneperoxidase(GSHPx)easured,lungyeloperoxidase(MPO),TNFα,IL10contentsofTNFα,IL8

5、,MPO,MDAandlungactivitiesofSOD,GSHPx,andimprovethepercentoflymphocytesubpopulations.ConclusionsAstaxanthinhasprotectiveeffectsonADLinducedbyLPSinmice.【Keyl丙酮正己烷萃取。静置2h后，将脂溶性相收集（反复萃取直至水相成无色）。再利用减压旋转蒸发仪进行提取液浓缩处理。1.2.2虾青素提取液柱色谱纯化①装柱。将活化好的氧化铝装填于玻璃层析柱中，装填高度为12cm，用正己烷润湿。②洗脱。分别取2ml虾青素提取液上柱，

6、用50ml正己烷丙酮淋洗，收集洗脱液。将洗脱液用氮气吹干制粉，装入充满氮气的玻璃瓶内，-70℃储存备用。1.3虾青素鉴定参照全反式虾青素标准品，根据其HPLC中保留时间和紫外可见吸收光谱的特征峰进行鉴定。得到的虾青素提取液经过滤后用高效液相色谱分离。色谱条件：色谱柱：CCarotenoidS5(4.6mm×250mm)；流动相A：乙腈甲醇（V∶V=75∶25）；流动相B：MTBE；流动相A与B中分别加入0.05%三乙胺作为改性剂防止虾青素降解；线性梯度洗脱：B在8min内由0%增加至55%；8～35minB维持55%；35～40minB由55%减至0%；流速：

7、1.0ml/min;检测波长：l/nm=480；波长范围260～700nm；进样量：20μl。并收集后观察其光谱特征峰行为。通过色谱和光谱分析结果表明实验所用灌胃物为全反式虾青素，纯度为95%。1.4动物实验1.4.1ALI模型的建立与动物分组实验小鼠（购自中国军事医学科学院实验动物养殖中心）按体重随机分为6组：正常对照组、ALT模型组、虾青素低、中、高剂量组（10、15、20mg/kg）和阳性对照组（地塞米松5mg/kg），每组10只。虾青素组动物每天给予不同剂量的虾青素，正常对照组、ALI模型、阳性对照组给予溶剂(食用色拉油)，连续灌胃30d，每周称体重1次