脂多糖预处理对低氧诱导小鼠表达hif-1α的影响

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3、响中文摘要1脂多糖预处理对细胞性低氧小鼠巨噬细胞表达HIF．1a和VEGF的影响目的观察致炎因子脂多糖预处理对低氧状态诱导巨噬细胞在体外表达HIF．1a和VEGF的影响。方法培养小鼠巨噬细胞Raw264．7，采用CCK8法观察细胞在LPS和CoCl2作用下经不同时间培养后的增值情况，再将细胞分为以下4组：正常对照组(无处理因素)，LPS(1mg／L)组，COCl2(1001amol／L)组，LPS(1mg／L)预处理组(LPS-Pre，LPS作用8h后再给予COCl2刺激)。采用RT-PCR检测LPS和CoCl

4、2对Raw264．7表达HIF．1a和VEGFmRNA的影响；采用免疫细胞化学方法在镜下定性观察HIF．1a和VEGF蛋白在细胞的表达情况，采用Westernblot定量检测HIF．1a和VEGF蛋白表达水平的变化。结果(1)CCK8数据显示LPS和CoCl2对Raw264．7细胞增殖的影响均在8h后趋向稳定；(2)RT-PCR结果显示，与对照组比较，CoCl2组和LPS．Pre组表达HIF．1amRNA和VEGFmRNA均增加(P<0．05)，其中，LPS．Pre组表达水平高于CoCl2组(尸

5、3)DAB染色和Westernblot检测结果显示，与对照组比较，LPS组，CoCl2组，LPS．Pre组表达HIF．1a和VEGF蛋白均增加(P

6、雄性ICR(SPF级)小鼠随机分为正常对照组(无处理因素)，LPS组，低氧组，LPS预处理组(LPS．Pre组)。对照组无任何处理因素，给予低氧组咽后壁吸入生理盐水(509L)，给予LPS组和LPS-Pre组咽后壁吸入LPS(509L，29／L)。将低氧组和LPS预处理组小鼠放置于缺氧瓶中给予持续低氧处理2．5h后，处死小鼠，同时也处死未作低氧处理的对照组和LPS组小鼠，各组小鼠经解剖取出完整肺脏称取肺湿重，计算肺系数；取部分肺组织经HE染色进行组织病理学观察；部分肺组织经RT-PCR法检测各组HIF．1ttm

7、RNA的表达水平、并以Westernblot法检测各组HIF．1a蛋白的表达水平。结果(1)吸入LPS的两组小鼠肺系数明显增高，HE染色显示肺内明显炎症细胞浸润，部分肺组织发生炎性实变；(2)RT-PCR结果显示，LPS．Pre组HIF．1amRNA表达明显高于对照组；也明显高于LPS组和低氧组(P<0．05)(3)Westernblot结果显示，与对照组比较，LPS组和LPS．Pre组HIF．1a蛋白表达增加(P<0．05)，低氧组HIF．1a蛋白表达虽略有增加，但尚不显著；其中，LPS．Pre组表达水平也明

8、显高于LPS组和低氧组(P<0．05)。结论LPS预处理可增强小鼠肺组织在低氧时HIF．1amRNA和蛋白的表达。关键词：LPS，炎症，低氧，HIF．1a，RT-PCR，Westernblot，小鼠II作者：江丽丽指导老师：谢可鸣谢平脂多糖预处理对低氧诱导小鼠表达HIF—la的影响英文摘要EffectsofInflammatoryResponseontheExpressionofHIF