用高胰岛素正糖钳夹技术研究人参皂甙对2型糖尿病胰

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时间:2018-11-02

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1、用高胰岛素正糖钳夹技术研究人参皂甙对2型糖尿病胰【摘要】探讨人参皂甙对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠中PI3K的影响。[方法]运用高胰岛素正糖钳夹技术检测2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠,通过数学模型计算出葡萄糖输注速率(GIR)。[结果]三组人参皂甙组GIR均较高脂组不同程度的提高,人参皂甙Re组的GIR和正常组、高脂组有显著性差异。以ethods]Dividetheratsinto6groups,feedthroughthehighfatdiet,causethetype2diabetesmodel,afterfeedingfor4pcalculategl

2、ucoseinfusionrate,observethechangeoftheuscle,adiposeorganizeandliverorganize,regardPI3Kasobjectalbumen,observeexpressionofalbumentoemunetraceen,theexpressionoftheginsenosideRg1groupalgroup,ginsenosideRg1havesignificantdifferences,ginsenosideRb1hasthesignificantdifferenceproveth

3、einsulinreceptor(SRI)notablyofginseng,promotethephosphoricacidoftheinsulinreceptor,meanotePI3Ksignaltotransfertotheglucoseiceuglycemicclamptechnique;diabetes;ginsenosideRe.Rb1.Rg1;Phosphoinositide3kinase(PI3K)  1材料与方法  1.1药物和试剂  人参皂甙由吉林大学有机教研室提供,马来酸罗格列酮(葛兰素史克公司07030088),优泌啉(人

4、胰岛素)LILLY埃及批号:HRE014肝素钠(75u/ml)加入0.9%Nacl500ml(溶液中,共加入3支肝素(12500u/支),混匀,抽取5ml,配置PVP(6g)混匀,装入空瓶备用。磷酯酰肌醇3激酶抗(PI3K)(CellSignalingTechnology提供)、羊抗兔二抗(ICL实验室提供),蛋白酶抑制剂(北京鼎国生物技术有限公司)罗氏甘油三酯/总胆固醇(TG/CHOL)配套试剂,操作严格按照说明书操作。  1.2仪器  高速冷冻离心机(德国EPPENDORF公司)生物电泳图像分析系统(上海复日科技有限公司)日立全自动生化仪717

5、0OneTouchII微型血糖仪(美国Johnson公司产品)  1.3动物分组  SD大鼠,雄性60只(中科院上海斯莱克实验动物有限责任公司),批号:scxk(沪)2003-0003。体重:180g左右。随机分成6组,每组10只,笼养一周,以适应环境。第二周开始,除正常组外,每组用高脂饲料喂养,自由取食,每只每天18g,每天给饲料前称量记录大鼠体重,同时,称量记录大鼠吃剩的饲料,喂养2周后,开始给药,对照组予罗格列酮6mg/(kg·d),灌胃,Rg1、Rb1、Re各组50mg/(kg·d),灌胃,连续灌服2周,给药期间,各组仍予高脂饲料喂养,自由取

6、食,每天称量体重,造模形成大鼠高脂血症胰岛素抵抗2型糖尿病模型,更接近人的高脂血症引起的2型糖尿病。  1.4插管  所有大鼠用3%戊巴比妥那腹腔麻醉(0.15ml/100g)。麻醉显效后,在无菌状态下切开颈部皮肤,钝性分离皮下组织及肌肉,显露、分离左右侧颈静脉,进行左右侧颈静脉插管,并将导管固定于肩胛部皮肤。用无菌锥型金属帽封堵导管口,缝合颈部皮肤。  1.5高胰岛素  正常血糖钳夹术将准备好的大鼠一侧颈静脉导管接上三通管的一端,三通管的另两端分别接上输注胰岛素和葡萄糖的输液管。另一侧颈静脉导管接上一细管,用于取血,接或以5ml空针(内有75U/

7、ml的肝素溶液)注射以防凝血。首先从颈静脉抽取血液,用OneTouchII微型血糖仪(美国Johnson公司产品)测定基础血糖2次,然后,以恒定的速率(25U/(kg·min)输注胰岛素。以后每10min测定血糖1次,当血糖值低于5.0mmol/L时开始输注25%葡萄糖。调整葡萄糖输注速率(Glucoseinfusionrate,GIR),使血糖控制在4.5mmol/L(4.5至5.5mmol/L)左右。90min后,当连续5次血糖值均在上述范围时,即认为达到了稳定状态。计算GIR=25%葡萄糖浓度×葡萄糖输入量(ml)/体重(kg)×时间(min)

8、,将数值记录在表格。  1.6取材  大鼠取肝脏组织,以液氮冷冻后,存储予低温冰箱(-70℃)备用。  1.

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