高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立-董立厚

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1、高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立及应用董立厚，宋海峰【作者简介】董立厚（1979—），男，河北清河县，博士研究生，研究方向：生物技术药物药代动力学*通讯联系人，宋海峰，songhf@nic.bmi.ac.cn，Tel:(010)66930259（军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京100851）【摘要】目的：在比格犬中建立高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术。方法：以5只健康比格犬为实验对象进行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验，考察血糖、胰岛素、C肽及胰高血糖素等指标。结果：成功将血糖控制在目标水平

2、，变异系数小于5%；实验过程中血清胰岛素最后稳定在40.0±3.8mIU·L-1，显著高于基础胰岛素水平；血清C肽浓度显示内源性胰岛素受到了明显的抑制，胰高血糖素没有显著升高。结论：在比格犬体内建立高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术，并将其成功用于胰岛素制剂药效动力学的评价。【关键词】：高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术；药效动力学；比格犬Theeuglycemicclamptechniquewasestablishedinbeagledogs[Abstract]Objective:Toestablisheugl

3、ycemicclamptechniqueinbeagledogs.METHODS:Theeuglycemicclamptechniquewasappliedinhealthybeagledogsandthebloodglucose,insulin,C-peptide,insulinandglucagonweremonitoredduringtheclampperiod.RESULTS:Thebloodglucoselevelwascontrolledwithinthebasallevel,coef

4、ficientofvariationbeinglessthan5%duringtheclampperiod.Theseruminsulinconcentrationfinallyreachedtothelevelof40.0±3.8mIU·L-1stablyandasignificantinhibitionwasshowedinendogenousinsulinbythedeterminationofC-peptide.Buttherewasnotsignificantincreaseofseru

5、mglucagoncomparedwithbasalvalues.CONCLUSIONS:Methodologyconfirmedthattheeuglycemicclamptechniqueissuccessfulinbeagledogsandcanbeappliedinstudyofpharmacodynamicsofinsulinpreparations.KEYWORDS:euglycemicclamptechnique;pharmacodynamics;beagledogs高胰岛素-正葡萄

6、糖钳夹技术[1]由于定量准确、可重复性好、避免低血糖等优点，已成为胰岛素敏感性评价的金标准[2]。近年来该技术已扩展应用于胰岛素制剂药代动力学及药效动力学评价方面[3-6]，但目前国内在此方面应用的报道较少，特别是在比格犬中的应用还未见报道。国外文献对于该方法也只有概略性的描述，没有提供方法质控的指标。本实验旨在归纳总结现有文献报道，将该技术细节及技术指标进一步明确，以利于该技术在比格犬中的应用。1材料与方法1.1动物健康比格犬5只，体重12±2kg，军事医学科学院动物中心产。动物生产许可证号：京

7、动SCXK字0046591号。分笼，用比格犬标准饲料饲养，定时通风、光照，自由饮水。在实验前一周将其悬吊在巴甫洛夫吊带内进行适应性训练。1.2药品及试剂受试药品：皮下注射用常规胰岛素：江苏万邦生化股份有限公司生产，批号0412A10，在无菌条件下溶解于含0.2％的白蛋白注射用水中。猪胰岛素测定采用美国R&DSYSTEMS公司产Quarantine®IVD®humanErythropoietinELISA试剂盒测定；C肽放免试剂盒及胰高血糖素放免试剂盒（由解放军总医院免疫实验室提供并检测）。1.3仪

8、器艾美达μVP5005输液泵（瑞士艾美达生产）；艾美达μSP5005注射泵（瑞士艾美达）；强生血糖仪（稳豪型，美国强生公司）；MicroscanMK2全自动酶标仪（芬兰Labsystem公司）。1.4方法1.4.1高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的建立比格犬禁食14-16h后，用巴甫洛夫吊带固定在实验架上。在比格犬一侧前肢建立静脉输注通道，该通道连接三通管，一端连接胰岛素注射泵，一端连接葡萄糖输注泵；在另一前肢穿刺并留置导管作为取血通道测量血糖，用电热毯包裹加热，将其温度控制在45-55