西维来司钠对高原颅脑损伤大鼠中性粒细胞弹性蛋白酶

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1、西维来司钠对高原颅脑损伤大鼠中性粒细胞弹性蛋白酶【摘要】目的探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对大鼠高原颅脑损伤的影响及NE抑制剂西维来司钠对高原颅脑损伤的神经保护作用。方法取雄性SD大鼠48只，随机分为6组。即平原对照组，平原颅脑创伤组，平原颅脑创伤+西维来司钠治疗组，高原对照组，高原颅脑创伤组，高原颅脑创伤+西维来司钠治疗组。创伤组按Feeney自由落体撞击法制作大鼠高原与平原颅脑损伤模型，对比观察高原与平原颅脑创伤前后以及给予西维来司钠治疗后血清NE浓度变化，并通过病理学观察西维来司钠治疗对高原颅脑损伤的神经保护作用。结果大鼠高原颅脑创伤前后NE浓度均明显高于平原颅脑创伤前后(P&l

2、t;0.05)，脑组织病理形态结果显示，高原大鼠颅脑创伤后立即给予NE抑制剂西维来司钠治疗，颅脑损伤程度较未治疗组明显减轻。结论NE是加重大鼠高原颅脑损伤后神经组织损伤的重要因素，西维来司钠治疗对高原颅脑损伤的神经组织具有明显的保护作用。【关键词】颅脑损伤;弹性蛋白酶;西维来司钠;神经损伤;高原　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofneutrophilelastase(NE)intraumaticbraininjuryandneuroprotectiveeffectofsivelestatinratsatsimulatedhighalt

3、itude.MethodsTotally48adultmaleaticbraininjuryatbothsimulatedhighaltitudeandplainadebyFeeney’smethod.ThelevelofNEbeforeandafterthecraniocerebralinjurybetentulatedhighaltitudegroupulatedhighaltitude.ConclusionNEisanimportantfactorintraumaticcraniocerebralinjuryatsimulatedhighaltitude,andsivelestat

4、hasanobviousneuroprotectiveeffectintraumaticcraniocerebralinjuryatsimulatedhighaltitude.　　Keym，击锤重20g，下落高度20cm，落体致伤的冲击力为20g×20cm。动物称重后腹腔注射10%乌拉坦(15ml/kg)，麻醉后固定大鼠头部，沿正中线切开头皮并剥离骨膜，用颅骨钻于人字缝后2mm、中线右旁2mm处钻开直径4mm的圆形骨窗，保持硬脑膜完整。将撞杆头端置于骨窗处，击锤沿外周套管自由落下冲击撞杆，造成右后叶颅脑创伤。平原对照组大鼠为常压下随机抽取8只，不作创伤处理。　　3高原大鼠颅脑创伤模型制备

5、　　制备动物模型前3天将大鼠放入模拟海拔5000m低压氧舱内连续减压低氧3天，23h/d，1小时用于喂食、清洁氧舱。按平原大鼠颅脑创伤方法于第3天开舱时复制高原创伤模型，之后将大鼠继续放入5000m海拔高度减压24小时。高原对照组大鼠采取同样方法于低压舱内饲养3天，但不作创伤处理。　　4颅脑创伤后治疗　　平原与高原颅脑创伤组大鼠创伤后，治疗组立即分别给予尾静脉一次性注射NE抑制剂西维来司钠150mg/kg(生理盐水溶解药物，药液总量控制在5ml/kg体重)治疗。非治疗组给予等容积的生理盐水。平原组与高原组动物分别于常压和减压状态下治疗24小时后，取股动脉血测定NE浓度和取脑组织做形态学观

6、察。　　5NE浓度测定平原对照组经股动脉取血2ml，高原对照组大鼠于5000m低压氧舱减压缺氧3天后取血，其他4组分别于颅脑创伤后24小时后取血，各组血液3000r/min离心分离血清，-70℃保存待测。采用双抗体夹心ELISA法测各组血清中NE浓度，标本中的NE与试剂盒NE单抗结合。加入生物素标记的抗大鼠NE(二抗)，形成免疫复合物辣根过氧化物酶标记的抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)与二抗结合。最后加入四甲基联苯胺(TMB)显色，于OD值450nm测定NE浓度。　　6病理学检查　　平原、高原颅脑创伤组与对应的颅脑创伤治疗组大鼠取血后立即处死，解剖取脑组织标本置于10%甲醛

7、中固定。以创伤灶为中心取材，常规石蜡包埋，苏木素伊红(HE)染色光镜下观察。　　7统计学处理　　数据应用软件Spss13.0分析结果，两组间资料统计采用两样本t检验，计算P值得出结论，P<0.05为差异显著，有统计学意义。结果　　1高原与平原颅脑创伤后血清NE的浓度变化及西维来司钠对其的影响　　结果所示，平原与高原组大鼠各自进行组内比较：颅脑创伤组大鼠NE水平均较对照组大鼠明显升高(P<0.05)，而静脉给予NE抑制剂