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1、支扩宁合剂对支气管扩张症大鼠中性粒细胞弹性蛋白酶的作用作者:吴其标,孙子凯,曹世宏,万毅刚【关键词】支扩宁合剂;,,支气管扩张症;,,实验研究;,,动物模型,;,,中性粒细胞弹性蛋白酶, 摘要:目的:研究支扩宁合剂对支气管扩张症模型中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的作用,探讨支扩宁合剂疗效机理。方法:建立SD大鼠支气管扩张症模型,观察呼吸道冲洗液中性粒细胞弹性蛋白酶含量及支扩宁合剂干预后的变化,探讨它们在支气管扩张症发病中的地位及支扩宁合剂的干预效果。结果:支扩宁合剂明显降低NE含量(P<0.01)。结论:支扩宁合剂能显著减少支气管扩张症气道中NE释放,抑制其蛋白分解活
2、性,这可能是其疗效机理之一,有进一步研究开发价值。 关键词:支扩宁合剂;支气管扩张症;实验研究;动物模型;中性粒细胞弹性蛋白酶 EffectofZhikuoningDecoctiononNeutrophilElastaseofAnimalModelalmodelonasAeruginosa.TheeffectofZhikuoningDecoctiononanimalmodelentalresearch;Animalmodel;Neutrophilelastase 支气管扩张症(bronchiectasis,BE)的发病机制尚未完全清楚,但近年来研究认为潜在致病微
3、生物建群(colonization)、慢性炎症和蛋白分解酶形成一个慢性的、持续的、复杂的交互作用,导致支气管树的进行性破坏[1]。 BE气道炎症反应以中性粒细胞移行及继发分泌多种引起组织损伤的炎症介质为特征[2,3]。中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophilelastase,NE)是中性粒细胞释放的重要炎症介质之一,可降解细胞外基质[4],造成支气管-肺组织破坏,NE约占全部蛋白分解酶总分解活力的80%,除分解弹性蛋白外,它还能分解胶原蛋白、蛋白多糖、纤维连接蛋白等。NE促进炎症、细菌感染迁延[5],并引起粘液高分泌状态,其浓度及活性可反映该病的活动性和严重性[5
4、,6]。因此,有学者提出,对BE应当针对炎症、NE、感染因素采取综合治疗,才能取得更好效果[5]。 因BE病程常迁延反复,长期疗程和细菌耐药性使抗生素的应用受到局限,而且抗生素治疗仅能在BE加重期控制气道感染,对慢性炎症和蛋白分解活动则几乎无效[7];迄今为止,尚未找到一种理想的NE抑制剂应用于BE的防治。我们经临床观察及动物实验研究初步表明,支扩宁合剂对BE有较好的疗效,但其机理尚不清楚。本实验在中医药理论指导下,应用现代分子生物学技术,证实支扩宁合剂对BE动物模型NE的抑制作用,揭示了中药支扩宁合剂疗效机理的一个方面,报道如下。 1实验材料 1.1实验动物S
5、D大鼠80只,体重185~220g,雌雄不拘,由中国科学院上海实验动物中心提供,许可证号SCXK(沪)20020010。置于南京中医药大学SPF级实验室喂养。 1.2细菌将标准绿脓杆菌菌株接种到培养基上,在37℃温育箱中培养24h,用生理盐水冲洗数个典型菌落,按比浊法调整其浓度为105CFU・L1,配制绿脓杆菌液2ml。由江苏省人民医院微生物室提供。 1.3实验药品 1.3.1支扩宁合剂3000ml(1.881g/m1),为复方中药制剂,由南京中医药大学第一附属医院制剂室提供。方剂组成:黄芩10g,桑白皮10g,杏仁10g,枳壳10g,郁金10g,
6、南沙参10g,麦冬10g,薏苡仁15g,冬瓜仁15g,全瓜蒌15g,黛蛤散15g,丹参15g,白茅根30g。该方为60kg标准体重患者的有效治疗量,相当于生药2.917g・kg1・d1,按陈奇[8]动物剂量换算公式,大鼠的等效量相当于生药18.81g・kg1・d1。以200g大鼠等效量的5倍(生药18.81g・d1)为治疗量。 1.3.2氧氟沙星液1500ml(0.016g/m1),北京制药厂,批号:020502。据报道[9],人BE的氧氟沙星有效剂量为0.01g・kg1ӥ
7、9;d1,按陈奇动物剂量的换算公式,大鼠的等效量相当于0.0645g・kg1・d1。以200g大鼠等效量的5倍(0.0645g・d1)为治疗量。 1.4实验试剂大鼠NEELISA试剂盒由美国TPI公司生产,上海朗卡公司代购。批号:0903F3。 1.5实验仪器 1.5.1BIORAD550酶标仪BIORAD公司。 1.5.2TL-420型恒温水箱江苏姜堰天力医疗设备厂。 2实验方法 2.1支气管扩张症模型的建立按 4讨论 BE主要临床表现为慢性咳嗽、咯脓痰、咯血等,属中医学“咳嗽”“咯血”