缺血性脑血管疾病患者血浆利钾尿肽水平增加及临床意

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1、缺血性脑血管疾病患者血浆利钾尿肽水平增加及临床意【摘要】目的　　探讨利钾尿肽（KP）在缺血性脑血管疾病（ICVD）中的意义。方法　　用放射免疫分析方法测定30例缺血性脑血管疾病（ICVD）患者血浆KP含量。结果　　ICVD患者在发病7天内血浆KP水平升高。结论　　KP含量变化在ICVD病理生理中起着一定的作用。【关键词】缺血性脑血管疾病利钾尿肽　　　　KP是同心钠素（ANP）于同一前体分子—心钠素前体（Pro-ANP）的活性多肽。ANP及其他前体肽均于由126个氨基酸所构成的Pro-ANP。ANP是指在Pro-ANP羧基端经过水解后得到的99～126位氨基酸所组成

2、的肽链。Pro-ANP氨基端的片段在水解为1～98片段之后再进一步水解为1～30；31～67；68～78和79～98。目前已经明确结构生物学活性的多肽片段主要有三个，其中Pro-ANP1-30称为长效利钠刺激因子（long-actingsodiumstimulator）；Pro-ANP31-67称为血管舒张因子（vesseldilator）；Pro-ANP79-98称利钾尿肽（kaliureticpeptide，KP）［1］，它们不仅具有同ANP一样的利尿、利钠、排钾以及降低血压的生理作用，而且作用时间比ANP长，效力比ANP大，其中KP具有最强的抑制肾皮质和髓质

3、NA+-K+-ATP酶活性的作用［2］。本研究的目的在于探讨KP在ICVD中的临床意义。　　1　　资料与方法1.1　　ICVD组　　30例ICVD患者均是我院2006年6～10月住院患者，诊断按照全国第四届脑血管疾病学术会议通过的各类脑血管疾病诊断要点［3］，并全部经头颅CT扫描确诊。30例中，男20例，女10例，年龄45～82岁，平均62.70±10.44岁。所有病例均行电解质、肝功、肾功、胸片及心电图检查，部分患者行超声心动图检查，以排除心脏疾病的影响。1.2　　对照组　　24例，男10例，女14例，年龄45～75岁，平均58.31±6.52岁，均为我院门诊体

4、检的健康成年人。1.3　　标本的采集与测定方法　　ICVD组患者分别于发病后7天内抽血留取标本。ICVD组和对照组均于清晨空腹采取静脉血3ml，注入含10%EDTA和抑肽酶各30μl的试管中，混匀，3000rpm离心10min，分离血浆，-80℃冰箱待测KP。1.4　　实验方法1.4.1　　［125I］-Kp的制备　　5μgKP（美国PhoenixPharmINC）,加入含10μgiodogen（sigma）的试管中，再加入37GBq的Na［125I］，反应4min，取出反应物即终止反应，将其直接移至反向C18高压液相层析柱上（0.39cm×30cm），用20%～

5、60%乙腈（含有0.1%三氟乙酸）梯液洗脱，速率为0.4ml/min,得到放射比活为64.75PBq/mol的KP标记物，使用时，用0.1mol/L，pH7.4的PBS（内含1g/LBSA，1g/LNaN3，1g/LNaCl，0.1%TritoX-100）（放免缓冲液）稀释成工作浓液。1.4.2　　KP的放免分析　　取上述留取的大鼠和人的血浆100μl，加入免抗人KP抗血清100μl（PhoenixPharm，INC），在4℃下孵育过夜，再加入100μl［125I］-KP（15000cpm/管）。再于4℃下孵育24h，加入500μlPR分离剂（东亚免疫技术研究所）

6、，混匀室温放置15min，4℃，3000r/min离心20min，取沉淀作γ计数，再根据同时用KP标准品（PhoenixPharm，INC）配制的标准曲线计算出样品的KP含有量，此标准曲线测定范围是36.6～2345.4pmol/L，非特异结合<6%，批间、批内变异系数分别是（10.4±2.7）%（n=5）和（6.8±2.0）%（n=10）。KP抗血清具有很强的特异性，与ANP、内皮素、降钙素基因相关肽及AⅡ均无交叉反应。1.4.3　　ANP的放免分析　　血浆样品的ANP含量采用东亚免疫技术研究提供的心钠素放免药盒，依说明书测定完成。1.5　　统计学处理　　

7、结果数据以均数±标准差（〖x〗±s）表示，数据分析用t检验。　　2　　结果　　30例ICVD患者血浆KP含量4.10±0.75ng/ml，与对照组3.48±0.78ng/ml比较显著增加（P<0.01）。3　　讨论KP是同ANP于同一前体分子—心钠素前体（Pro-ANP）的活性多肽，KP是前体分子水解后位于79～98位氨基酸的片段，而ANP是99～126位氨基酸的肽链。KP合成同ANP（99～126）一样，主要是在心房进行的，合成后的多肽贮存在心肌细胞的贮藏颗粒之中，受到释刺激因素如血容增加，心房扩张及钠负荷增加等刺激时释入血，随血液循环，分布至全身［2］。

8、KP不仅具