n乙酰半胱氨酸对急性肺损伤大鼠环氧合酶2的影

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1、N乙酰半胱氨酸对急性肺损伤大鼠环氧合酶2的影【摘要】目的：探讨N乙酰半胱氨酸(NAC)对急性肺损伤(ALI)大鼠环氧合酶2(COX2)的影响,进一步研究N乙酰半胱氨酸对急性肺损伤(ALI)肺组织的保护作用。方法：应用脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)模型,然后应用N乙酰半胱氨酸进行干预。实验设对照组、模型组、N乙酰半胱氨酸组，在肺损伤模型成功后24h处死大鼠,取左叶肺组织。采用免疫组化染色,检测N乙酰半胱氨酸对急性肺损伤大鼠肺组织中COX2的表达,利用HPIAS2000图像分析系统测定COX2在以上各组中表达的

2、平均光密度和平均阳性面积率。结果：实验对照组肺组织中COX2的表达较低；模型组肺组织中COX2的表达高；N乙酰半胱氨酸组肺组织中COX2表达较低。经q检验，实验对照组与模型组之间，COX2的平均光密度及阳性面积率有显著性差异(P＜0.01﹚，实验对照组与N乙酰半胱氨酸组之间，COX2的平均光密度及阳性面积率差异无显著性(P＞0.05)。结论：N乙酰半胱氨酸可以减轻肺损伤的程度，对急性肺损伤组织具有重要的保护作用。【关键词】N乙酰半胱氨酸肺损伤环氧合酶2(COX2)　急性肺损伤(acutelunginjury,ALI)是一种

3、肺部过度炎症反应,以肺泡毛细血管膜损伤、通透性增加、肺水肿,炎性细胞浸润和严重气体交换障碍为主要特征［1］。N乙酰半胱氨酸(NAC)是左旋精氨酸的天然衍生物,是一种含活性巯基化合物［2］。近年国内外大量实验研究结果已经证明,具有强大的抗氧化和细胞保护作用。　　但有关NAC对急性肺损伤炎性细胞因子影响的研究尚少。我们应用脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)模型,然后应用NAC进行干预，观察急性肺损伤大鼠肺组织中COX2的表达，进一步探讨NAC在防治急性肺损伤中的作用机制。　　1材料和方法　　1.1动物模型制备及分组健康g/kg，n=2

4、0)、NAC组（于尾静脉注射LPS前1h分别经腹腔注射NAC(200mg/kg)，n=20）。称重后,7%水合氯醛5ml/kg腹腔注射麻醉,仰卧固定,模型组消毒后经颈外静脉缓慢注射LPS2.5mg/kg。　　1.2动物标本制备将各组动物处死，收集肺组织标本，进行组织学及免疫组织化学标本制作。取材时间为LPS注射后24h(T24)。　　2主要试剂浓缩型兔抗鼠COX2多克隆抗体(武汉博士德生物技术公司)；超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒（福州迈新生物有限公司）；显色试盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）。　　2.1主要仪器Y，常规脱

5、蜡至水，蒸馏水洗；②3%过氧化氢，37℃孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4×5min；③COX2采用微波抗原修复（3档，10min），采用高压抗原修复PBS洗4×5min；④正常羊血清37℃孵育10min以减少非特异性反应；⑤一抗37℃孵育1h，PBS洗4×5min；⑥生物素标记的二抗，37℃孵育10min，PBS洗4×5min；⑦链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶复合物37℃孵育10min，PBS洗4×5min；⑧DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应；⑨苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照。　　3.3免疫

6、组织化学结果判断COX2相关抗原以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照除细胞核染成蓝色外，胞浆内无棕黄色反应物。　　采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对COX2的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野（×400），测定COX2每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值（阳性面积率＝单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100％）。　　3.4统计学处理对各组免疫组

7、织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNKq检验，检验水准α为0.05。　　4结果COX2的表达：对照组肺组织内可见少量的棕黄色颗粒,COX2呈低表达；模型组肺组织内可见密集分布的棕黄色颗粒,COX2呈高表达；NAC组肺肺组织内可见少量的棕黄色颗粒,COX2呈低表达。图像分析结果显示：对照组COX2表达的平均光密度为0.0851±0.0332；模型组COX2表达的平均光密度为0.3349±0.0524；NAC组COX2表达的平均光密度为0.0765±0.0357。对照组COX2表达的阳性面积率0.087

8、9±0.0223；模型组COX2表达的阳性面积率为0.2840±0.0457；NAC组COX2表达的阳性面积率为0.0942±0.0247。经单因