ilk在cgvhd狼疮样小鼠肾小管上皮细胞转分化

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1、ILK在cGVHD狼疮样小鼠肾小管上皮细胞转分化【摘要】目的观察整合素连接激酶（ILK）在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠肾脏中的表达，探讨其在狼疮肾炎肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法建立cGVHD狼疮样小鼠模型，将小鼠分成正常对照组(A组)、12周模型组(B组)和16周模型组(C组)，每组6只。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、RNA和蛋白在肾组织中的表达。结果RT-PCR和RNA和蛋白表达较A组升高(P均＜0.01)，E-钙粘蛋白表达降低(P均＜0.01)。ILK蛋白和mRNA表达与α-SMA表达呈正相关

2、（r分别为0.83，0.86，P均＜0.01），与E-钙粘蛋白表达呈负相关（r分别为-0.84，-0.89，P均＜0.01）。免疫组化结果表明，与A组相比，B、C两组小鼠肾小管及间质均可见ILK、α-SMA蛋白显著表达，而E-钙粘蛋白的表达显著减少。结论cGVHD狼疮样小鼠肾组织中ILK蛋白及mRNA表达明显上调，可能通过介导肾小管上皮－间充质细胞转分化而参与了狼疮肾炎肾间质纤维化的进程。【关键词】移植物抗宿主病；狼疮肾炎；粘蛋白类；肾小管；小鼠；动物实验　　Abstract:ObjectiveTodeterminetheexp

3、ressionofintegrin-linkedkinase(ILK)inrenaltissueofmiceesenchymaltransition.MethodscGVHDlupusnephritismicemodelsiceodelgroup,n=6)andgroupC(16-odelgroup,n=6).ThemiceRNAexpressionsofILK,alpha-SMAandE-Cadherininkidneymunohistochemistry,RNAexpressionofE-cadherinRNAexpress

4、ionsofILKayplayanimportantroleintheprocessoflupusnephritisthroughmediatingtheepithelial-mesenchymaltransition.　　Keyucins;kidneytubules;mice;animalexperimentation　　狼疮肾炎（lupusnephritis，LN）是系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus，SLE）最常见临床表现之一，其病理改变具有多样性及不均一性，以肾小球、肾血管、肾间质的损害

5、为主要特征，后期可发展为肾小球硬化、纤维性新月体、间质纤维化及其肾小管萎缩等。与其他慢性肾脏疾病一样，肾脏纤维化是各型LN进展到终末期的必经阶段。肾小管上皮细胞间充质转分化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）在肾脏纤维化的发生发展中起重要作用，近年来一些研究提示整合素连接激酶（integrin－linkedkinase，ILK）可能是介导EMT的关键因子［1］，但是在LN中EMT的形成以及ILK与EMT关系的研究报道尚少。我们以慢性移植物抗宿主病（chronicgraftversushos

6、tdisease，cGVHD）狼疮样小鼠为模型，观察不同时期ILK、E-钙粘蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾组织中的表达，并探讨ILK在狼疮肾炎肾小管上皮细胞转分化中的作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物8～10周龄（C57BL/6J×DBA/2）F1代杂交雌性小鼠（以下称F1代鼠）及4～6周龄DBA/2雌性小鼠购自中山大学医学动物中心，体重（19.99±1.99）g，SPF级。　　1.2模型的建立与分组按随机设计原则将F1代鼠分为正常对照组（A组）、12周模型组（B组）及16周模型组（C组），每组6只小鼠。建立c

7、GVHD狼疮样小鼠模型。取DBA/2小鼠脾脏、胸腺、淋巴结细胞，制成单细胞悬液（约60%脾细胞、30%胸腺细胞及10%淋巴结细胞）。分别于第0、3、7、10天注射于模型组F1代鼠，每次注射给予细胞数约为50×106个。正常对照组于相同时间点经尾静脉注射与单细胞悬液等体积的生理盐水。于首次注射单细胞悬液之日起，于第12周末处死B组小鼠，于第16周末处死A组和C组小鼠。处死后立即取下肾脏，将肾包膜完全剥离后，一部分保存于-80℃以备提取总RNA和蛋白质，另一部分固定于10%中性福尔马林溶液中，经石蜡包埋后切片进行组织病理检查及免疫组

8、织化学实验。　　1.3组织病理切片2μm连续切片，至经多聚赖氨酸包被的载玻片上，二甲苯脱蜡，梯度酒精至水，分别行苏木素－伊红（hematoxylin－eosin，HE）染色和Masson染色。　　1.4免疫组织化学SP法进行免疫组化染色。将肾组织石蜡切片经二甲苯