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1、大鼠脑中清脑宣窍方栀子苷等3个指标性成分的高效液【摘要】目的建立大鼠脑中清脑宣窍方有效部位中3个指标性成分栀子苷、人参皂苷Rg1、Rb1的HPLC浓度测定方法。方法大鼠脑样品取出，洗去残血、匀浆、甲醇提取、离心后水溶，用C18固相萃取柱处理，以亥茅酚苷为内标，选用色谱柱：AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)，EclipseXDB-C18保护柱。流动相为乙腈-甲酸水二元梯度洗脱，柱温为30℃，流速为1.0ml/min，检测波长为203nm。结果各成分的最低检测限(S/
2、N>3)在0.16～1.1mg/L之间,平均回收率均在90%以上,日内、日间精密度及稳定性的RSD均小于10%。结论该方法简便、准确，可用于脑组织中清脑宣窍方有效部位栀子苷、人参皂苷Rg1、Rb13种成分定量分析。【关键词】清脑宣窍方;栀子苷;人参皂苷Rg1;人参皂苷Rb1;高效液相色谱QuantitativeDeterminationof3MainponentsinEffectiveFractionofQingnaoxuanqiaoFormulainSDRatBrainbyRP-HPLC Abs
3、tract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminationoftheconcentrationsinratbrainsofgeniposide,ginsenosideRg1andginsenosideRb1byHPLCintheeffectivefractionofQingnaoxuanqiaoFormula.MethodsTheratbrainsamplesainingblood,smashedintoplasm,extractedbyMeOH,anddissol
4、vedbynofC18solidphaseaudolatographycolumnofAgilentEclipseXDB-C18chromatographycolumn(4.6mm×250mm,5μm)andaprotectivecolumnofEclipseXDB-C18.Themobilephasentemperaturel/minandthedetection.ResultsThelo0.16to1.1mg/L.Theaveragerecoveryethodiseasyandaccurate,ula
5、inbraintissue. Keyula;Geniposide;GinsenosideRg1;GinsenosideRb1;HPLC 清脑宣窍方为王永炎院士救治脑中风临床经验方，由栀子、三七等中药组成。本方及其有效部位具有清热解毒、宣窍活络的作用，对于缺血性脑中风具有显著的疗效[1,2]。栀子苷，人参皂苷Rg1，Rb1为该方主要药效成分[3,4]。为了解其在体内的分布及代谢情况,本文建立了HPLC同时测定清脑宣窍方有效部位中3种成分在脑组织中的浓度测定方法。 1仪器与试药 l，200mg，60μ
6、m，北京艾杰尔科技有限公司)。 栀子苷，人参皂苷Rg1、Rb1对照品(批号分别为：110749-200309，110703-200322，110745-200312)购自中国药品生物制品检定所，亥茅酚苷对照品由北京中医药大学药化室提供。 清脑宣窍有效组分(由栀子和三七药材混合提取再经大孔树脂富集后按比例加入天然冰片制备而成，自制)。乙腈(Fisher公司)，色谱纯;屈臣氏重蒸水;其他试剂均为分析纯。 SD大鼠,体质量为(300±10)g，雄鼠(由北京市维通利华实验动物技术有限公司提供)。 2方法与
7、结果 2.1给药方法及脏器处理健康SD大鼠，用药前禁食18h，单剂量灌服清脑宣窍有效部位(6g/kg),于给药后60min取出脑，生理盐水浸泡,洗去残留血液,-40℃保存备用。 2.2对照品溶液和内标溶液的制备精密称取栀子苷，人参皂苷Rg1、Rb1对照品，置25ml量瓶中，加水制成一定浓度混合对照品储备液，临用时，用水稀释成标准系列浓度的对照品混合溶液;精密称取亥茅酚苷5mg，置100ml量瓶内，加水稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.05g/L的内标溶液。 2.3心脏样品处理取单个心脏，吸干水分，精密称
8、重，加入重量两倍体积的生理盐水，以18000r/min匀浆。匀浆液加入两倍体积的分析甲醇及0.025ml内标,涡旋振荡10min,混合液在6000r/min下离心20min,取出上清液，残渣再加入两倍体积甲醇，漩涡振荡10min,6000r/min下离心20min,两次上清液混合,常温减压回收至干。残渣用5ml液相水溶解，超声振荡，上SPE固相萃取柱，先用水洗脱3ml，再用甲醇洗脱2ml，收集甲醇洗脱液，常温减压干燥，残渣加甲
