口服清脑宣窍方后大鼠脑部化学成分研究

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1、口服清脑宣窍方后大鼠脑部化学成分研究【摘要】目的研究大鼠口服清脑宣窍方有效部位后进入脑组织的清脑宣窍方移行成分。方法大鼠脑样品取出，洗去残血、匀浆、甲醇提取、离心后水溶，用C18固相萃取柱处理，选用色谱柱：AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)，EclipseXDB-C18保护柱。建立大鼠口服清脑宣窍方有效部位后脑组织的LC-MS指纹图谱，并结合前期已分得的单体，对脑组织中移行成分进行了指认。结果确定了清脑宣窍方有效部位的靶器官脑的18个移行成分。结论清脑宣窍方栀子与三七的指标性有效成分栀子苷、人参皂

2、苷Rg1、人参皂苷Rb1均能进入脑，发挥作用。【关键词】清脑宣窍方；指纹图谱；体内化学成分；液相-质谱联用法；脑　　Abstract：ObjectiveToresearchontheneulaorally.MethodsTheratbrainsamplesainingblood,smashedintoplasm,extractedbyMeOH,anddissolvedbynofC18solidphaseatographycolumnofAgilentEclipseXDB-C18chromatographycolumn(4.6mm×250m

3、m,5μm)andaprotectivecolumnofEclipseXDB-C18.EstablishedLC-MSfingerprintofbrainofratafterratstakingeffectivefractionofQingnaoxuanqiaoformulaorally,andconfirmedtheconstituents，usingthemonomergotpreviously.ResultsConfirmed18mainfingerprintpeaksintargettissue:brain.ConclusionT

4、heindicativeeffectiveconstituentsofQingnaoxuanqiaoeffectivefraction:geniposide,ginsenosideRg1,ginsenosideRb1andnotoginsenosideR1canbefoundinthetargettissue:brainandexertpharmacologyeffection.　　Keyula；Fingerprint；Inner-bodychemistry；LC-MS；Braintissue　　清脑宣窍方为王永炎院士救治脑中风临床经验方

5、，由栀子、三七等中药组成。本方及其有效部位具有清热解毒、宣窍活络的作用，对于缺血性脑中风具有显著的疗效［1，2］；脑组织为其目标脏器之一。运用现代分析技术，在中药化学成分研究的基础上，研究大鼠口服清脑宣窍方有效组分后脑组织中存在的药物原型成分或代谢产物，有助于确定中药有效成分和作用机理研究。　　1器材　　SD-Trap-XCT/Plus型液质联用仪（美国Agilent公司）；SartoriousBT25S型1/100000电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；KQ-500DE型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；QL-901漩涡混和

6、机（其林贝尔仪器制造公司）；台式高速离心机（军事医学科学院实验仪器厂），匀浆机。　　栀子苷，人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1及三七皂苷R1对照品均购自中国药品生物制品检定所（批号分别为：110749-200309，110703-200322，110745-200312，110704-200318）；人参皂苷Re，Galioside，6α－Hydroxygeniposide，3,3',5,5'-四甲氧基-4,4'-二-β-D-葡萄糖双环氧木脂素，6″－对香豆酰龙胆京尼平双糖苷，藏红花酸-1-葡萄糖(6-1)葡萄糖苷，京尼平龙胆双糖苷，2α,3

7、β,19α,23-四羟基齐墩果-12-烯-28-酸，人参皂苷Rb2，Rb3，Rh1、Rf，Rc，Rg2，Rg3，Rd及三七皂苷fa，R4，R7及F2对照品由北京中医药大学石任兵教授课题组提供。　　乙腈（Fisher公司），色谱纯；屈臣氏重蒸水（液相用水）；Milli-Q系统纯化水（液质用水）；肝素、水合氯醛及甲酸为分析纯，均购自北京北化精细化学品有限责任公司。CleanertC18SPE固相萃取柱（3ml，200mg，60μm，北京艾杰尔科技有限公司）　　实验对象：SD大鼠：体重(300±10)g，雄鼠［北京市维通利华实验动物技术有限公司

8、提供,许可证编号：SCXK(京)2007－0001］。　　2方法　　2.1给药剂量及脑组织处理方法单剂量灌服清脑宣窍有效部位(6.0g/kg)；灌服清脑宣窍有效部位后1h取出大脑，吸干水分，精