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1、HPLC法测定梅花点舌丹中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基【摘要】目的建立梅花点舌丹中药材蟾酥中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为HypersilODS(250nm×4.6nm)；流动相：乙腈-水(43.5∶56.5)；柱温：室温；流速：1.0mL/min；检测波长为296nm；进样量20μL。结果华蟾酥毒基和脂蟾毒配基在5.31～63.75μg/mL、6.00～72.00μg/mL范围内与峰面积积分值呈现良好线性关系,相关系数r分别为0.9998和0.9997,平均回收率分别为99.45%、9
2、9.39%,RSD分别为1.32%、0.55%(n=6)。结论该方法准确、重复性好,可有效控制该产品的质量。【关键词】梅花点舌丹；华蟾酥毒基；脂蟾毒配基；高效液相色谱法HPLCDeterminationofPaeoniflorininHuachanshudujiandZhichadupeijiofMeihuadiansheDanSUFu-liShanxiMedicalCollegeforContinuingEducation,Taiyuan030012,ChinaAbstractObjectiveToestabli
3、shHPLCmethodfordeterminationofHuachanshudujiandZhichadupeijiintheChinesedrugChansuofMeihuadianshedan.MethodHPLCsystemincludesODScolumn,4.6mm×250mm,ThemobilephaseL/min.Thedetection.TheamountofinjectionL、6.00～72.00μg/mL(r=0.9998、0.9997).Theaveragerecoveries(n=6)
4、concentrationaddedinsamplesethodisrapid,accurateandreliable.Key型色谱工作站；岛津2401紫外分光光度计；超声波清洗器SK252H型(上海产)；分析天平(上海良平精密仪器有限公司,Max100g,D=0.0001g)。华蟾酥毒基(批号110803-200504)和脂蟾毒配基(批号110718-200507)对照品购自中国药品生物制品检定所,供含量测定用。乙腈、甲醇(天津四友)为色谱纯,其他试剂均为分析纯。水为重蒸水。2溶液的配制2.1供试品溶液的配制取重
5、量差异项下的本品,研细,约1.5g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定重量,超声处理(功率250in,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。 2.2阴性样品溶液的制备取缺蟾酥阴性样品,按“2.1”项下方法操作,即得。 2.3对照品溶液的制备 取华蟾酥毒基对照品15.94mg,精密称定,取脂蟾毒配基对照品18mg,精密称定,分别置25mL量瓶中,用甲醇溶解(必要时超声)并稀释至刻度,摇匀,分别精密量取各1mL,分别置10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液(每1m
6、L含华蟾酥毒基63.75μg、脂蟾毒配基72.00μg)。 3色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：乙腈-水(43.5∶56.5)为流动相；柱温：室温；流速：1.0mL/min；检测波长为296nm；进样量：20μL。理论板数按华蟾酥毒基、脂蟾毒配基峰计算不低于2700。色谱图见图1。 4方法学验证 4.1线性关系 取华蟾酥毒基和脂蟾毒配基对照品,精密称定,用甲醇稀释制成华蟾酥毒基为5.31、10.63、21.25、42.50、63.75μg/mL和脂蟾毒配基为6.00、12.00、24.00、48.
7、00、72.00μg/mL的系列。取上述溶液20μL,注入液相色谱仪,测定。结果华蟾酥毒基线性方程为Y=21.57X+10.15,相关系数r=0.9998；脂蟾毒配基线性方程为Y=18.79X-10.56,相关系数r=0.9997。结果表明,华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品分别在5.31～63.75μg/mL、6.00～72.00μg/mL范围内与峰面积积分值呈现良好线性关系。 4.2专属性取阴性样品溶液,注入液相色谱仪,测定。结果在与对照品主峰保留时间相同位置无色谱峰出现(见图1),证明此方法具有一定的专属性。
8、4.3精密度试验取同一供试品,分别按“2.1”项下方法制备供试品溶液。精密吸取20μL,注入液相色谱仪,依法连续进样6次。结果华蟾酥毒基RSD=2.89%,脂蟾毒配基RSD=1.50%；表明精密度良好。 4.4稳定性试验 取同一供试品溶液,在0、2、4、6、8、10、24h不同时间内,分别精密吸取20μL,注入液相色谱仪,进行测定。结果华蟾酥毒基RSD=
