hplc法测定菌毒清颗粒中丹酚酸b的含量

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1、HPLC法测定菌毒清颗粒中丹酚酸B的含量作者：范辉，宋粉云，钟兆健，肖若媚【摘要】目的测定菌毒清颗粒中丹酚酸B的含量。方法采用反相高效液相色谱法，DiamonsidTMC18柱，甲醇-乙腈-0.5%甲酸（体积比31∶10∶59）为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长286nm，柱温为30℃。结果丹酚酸B平均回收率为101.5%，RSD为1.95%（n=6）。结论该法可用于菌毒清颗粒中丹酚酸B的含量测定。【关键词】菌毒清颗粒；丹酚酸B；HPLC；含量测定　　Abstract:ObjectiveTod

2、eterminethecontentofSalvianolicacidBinJunduqinggranules.MethodsARP-HPLCmethodatographiccolumnonsil-C18.Themobilephaseethanol-acetonitrile-0.5%formicacid（31∶10∶59）ThefloL·min-1,andthedetection.ResultsTheaveragerecoveryforsalvianolicacidBethodethodcanbeusedf

3、orquantitativedeterminationofJunduqinggranules.　　Keyg，置50mL棕色量瓶中，加体积分数为75%的甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取10mL，置50mL棕色量瓶中，用体积分数为75%的甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（浓度为40μg·mL-1）。　　2.1.2供试品溶液的制备精密称取菌毒清颗粒样品约4g，置具塞锥型瓶中，精密加入体积分数为75%的甲醇25mL，称定重量，超声处理30min，放冷，称重，用体积分数为75%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤

4、过，弃去初滤液，续滤液0.45μm滤膜过滤，作为供试品溶液。　　2.1.3阴性对照液的制备取处方组成中除丹参外的其余成分制成不含丹参的阴性对照品，按“2.1.2”项下的制备方法处理得阴性对照液。　　2.2色谱条件及系统适用性试验色谱柱为Diamonsil-C18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司），甲醇-乙腈-0.5%甲酸（体积比31∶10∶59）为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长286nm，柱温为30℃。分别取对照品溶液（丹酚酸B浓度为12μg·mL-1）、供试品溶液和阴性对照溶液

5、10μL注入色谱仪，理论板数以丹酚酸B计算应不低于5000；丹酚酸B的拖尾因子为0.94，保留时间约为25min，丹酚酸B与其他组分可基线分离；阴性样品不干扰样品测定（图1）。　　1.丹酚酸BA.对照品B.样品C.阴性样品　　图1丹酚酸B对照品、样品及阴性的高效液相色谱图（略）　　Fig1HPLCchromatogramsofsalvianolicacidB(A)andsample(B)andnegative(C)　　2.3方法学考察　　2.3.1标准曲线制备分别吸取一定量的丹酚酸B对照品贮备液，加体积分数

6、为75%的甲醇稀释成丹酚酸B浓度为2、4、8、12、16、20、24μg·mL-1的溶液。依次进样10μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积（A）对对照品溶液质量浓度（ρ）进行回归，得丹酚酸B回归方程为A=9.85ρ-1.25，r＝0.9997。表明丹酚酸B质量浓度在2～24μg·mL-1之间与峰面积线性关系良好。　　2.3.2精密度试验取质量浓度为12g·mL-1的丹酚酸B对照品溶液10μL连续测定5次，其峰面积的平均值为115.9，RSD为1.97%，表明仪器精密度良好。　　2.3.3稳定性试验取供试品溶

7、液（20060809）在0，2，4，6，8h分别进样10μL，记录峰面积，结果4h峰面积的RSD=2.79%，8h峰面积的RSD=7.86%，表明供试品溶液在4h内稳定，超过4h不稳定，所以样品配制后应尽快测定。　　2.3.4重复性试验取同一批号（20060809）样品6份，照“2.1.2”方法处理并测定，结果丹酚酸B平均含量为0.076mg·g-1，RSD为2.26%。表明分析方法精密度良好。　　2.3.5加样回收试验精密称取同一批号样品（20060809）共6份，精密加入丹酚酸B对照品贮备液3.8mL，

8、照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收率，结果见表1。丹酚酸B平均回收率为101.5%，RSD=1.95%。结果表明本方法准确可靠。　　表1丹酚酸B回收率试验结果（略）　　Tab.1Resultsofrecoverytest　　平均回收率=101.5%,RSD=1.95%　　2.4样品测定取菌毒清颗粒3批，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液（12μg·mL-1）与供试品溶液各10μL，注