鸡ⅱ型抗菌肽leap-2的原核表达及抑菌研究

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1、鸡II型抗菌肽LEAP-2的原核表达及抑研宄许冬梅武晋孝田文霞闫芳高文伟马海利郑明学程志学赵宇军山西农业大学生命科学学院山!A!B=饲料兽药检查所山西农业大学动物科技学院摘要：为了研究鸡II型抗菌肽LEAP-2的体外表达产物的活性，试验进行了肝脏样品无菌采集，基因的克隆及密码子优化和表达，以表达产物对致病菌做纸片法药敏试验，判断其抑菌作用。结果表明，试验经低温处理获得了较好的肝脏总RNA，克隆并优化了鸡LEAP-2基因;经诱导得到了表达产物，形式为包涵体;抑菌试验表明，表达产物对16株分离致病菌具有抑制作用。关键词：LEAP-2;抗菌肽;原核表达;抑菌试验;作者简

2、介：许冬梅(1974-)，女，山西太谷人，讲师，硕士，主要从事动物遗传及机制研宄工作。收稿日期：2017-08-29基金：山西省科技攻关项目(20140311021-3)StudyonProkaryoticExpressionandBacteriostasisActivityofChickenTypeIIAntimicrobialPeptideLEAP-2XUDongmeiWUJinxiaoTIANWenxiaYANFangGAOWenweiMAHailiZffiNGMingxueCHENGZhixueZHAOCollegeofLifeScience，Shanxi

3、AgriculturalUniversity;FeedandVeterinaryDrugInspectionDepartmentofShanxiProvince;CollegeofAnimalScienceandVeterinary，ShanxiAgriculturalUniversity;Abstract：TodeterminetheantibioticactivityofchickenLEAP-2expressedinvitro,thegeneofLEAP-2wasappliedbyRT-PCRinstructedbythesequenceNMoOlOO16O

4、6，andthenwasdonewithcodonoptimizationandclonedintopGEX-6P-1.AfterexpressedinE.coliDE3，theexpressedproductwasmanagedtodoantibioticexperimentbybacteriostasiscircletest.TheresultsshowedthatchickenLEAP-2genehadasatisfiedgainunderliquidnitrogenprocessing,LEAP-2wasclonedandafteroptimizedthe

5、nexpressedbyincusionbodiestype,antimicrobialsusceptibilitytestresultshowedthat16E.colistrainownedinlaboratorywassensitivedtotheprotein.Keyword：chicken;LEAP-2;antimicrobialpeptide;prokaryoticexpression;bacteriostatictest;Received：2017-08-29鸡LEAP-2，是肝脏表达II型抗菌肽，为肝脏中产生并微量存在的一种抗菌肽［1-8］。在肉鸡

6、和蛋鸡养殖中，细菌感染和继发感染的治疗是一类比较棘手的问题。现代生活中，人们膳食结构的改变和对饮食质量的要求使得肉鸡和蛋鸡的生产逐年增加，其幅度之大可以用指数增长来形容。而动物的大量集中和高密度饲养使得病原菌有丫很好的滋生条件，同时药物的残留及有效的抗生素在兽医领域的禁用，导致了养鸡生产中针对细菌感染的药物选择越来越少，鸡LEAP-2抗菌肽的发现为解决这种困境提供了一种新的思路［9-16］。本研宄针对从鸡肝脏中克隆并优化了密码子的LEAP-2进行了原核表达，旨在能够提供一种可供选择的抗菌产品来缓解生产中病原菌的困扰。1材料和方法1.1材料1.1.1试验动物5只2周

7、龄健康红布罗鸡，购自太芥县肉鸡养殖场。4株致病性大肠杆菌来源于山丙农业大学动物科技学院预防系兽医微生物实验室分离菌株。1.1.2主要试剂DEPC溶液及DNA凝胶回收试剂盒、反转录试剂盒Codo#AT301-02、质粒小提试剂盒、DNA限制性内切酶EcoRI和NotI、反转录试剂盒E.coliDH5a，均购自天根生化科技(北京)有限公司；ITrizol试剂(货号15596026)，购自北京索莱宝科技有限公同；Trans5KDNAmarker,购自北京全式金生物技术有限公司；低分子蛋闩Marker,购自上海酶联生物研宄所。1.2方法1.2.1引物设计根据NCBI基因库

8、中和关的序