摘要：本文以响应面法对蜡状芽孢杆菌swwl6 液体

《摘要：本文以响应面法对蜡状芽孢杆菌swwl6 液体》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、摘要：本文以响应面法对蜡状芽孢杆菌SWWL6液体　　摘要：本文以响应面法对蜡状芽孢杆菌SgSO4?7H20和NaCl。采用部分因子分析法研究初始发酵培养基各种组分对产酶的影响程度，发现酵母膏、NH4NO3的质量浓度对产酶的影响显著。通过最陡爬坡实验逼近最大响应区域。中心组合设计和响应面分析法确定最优培养基组成为酵母膏0.64%、NH4NO30.384%、可溶性淀粉1%、MgSO4?7H200.1%，NaCl0.25%，甲苯20%。优化后相对酶活比优化前的提高了3.48倍。　　　　关键词：耐有机溶剂；脂肪酶；响应面法；

2、蜡状芽孢杆菌　　　　0引言　　　　脂肪酶(Lipase，EC3.1.1.3)是一类重要的甘油酯键水解酶，可以在油水界面上催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油。在特定的非水相系统中，还可催化水解反应的逆反应，以及酯化合成和转酯反应。从催化特性来看，脂肪酶具有化学选择性、高度的立体异构专一性、不需辅酶、高效、反应条件温和、无毒、副产物少等优点。近年来，随着非水相酶学的不断深入，脂肪酶的应用已超出了水相中水解反应的范围，被广泛应用于有机相中酯的合成、手性化合物的拆分、高聚物的合成、肽合成、生物柴油的合成等方面，具有广阔的应用前

3、景。有机合成大多数是在有机介质中进行的，而有机溶剂则易引起蛋白质的变性，使酶失活，因此限制了酶在有机合成中的应用[1]。如果一种脂肪酶能在高浓度的有机溶剂中具有稳定性，就能很好的解决催化环境受限的问题，使酶的催化反应更容易化，同时降低了酶的生产成本。　　因此耐有机溶剂脂肪酶的研究具有非常重要的意义。目前，关于耐有机溶剂脂肪酶的研究多见于国外报道，日本的OginoH等人筛选到有机溶剂耐受菌PsudomonasaeruginosaLST-03[2]。国内鲜见报道，尤其是关于蜡状芽孢杆菌脂肪酶还没有见到报道。　　1.4.1

4、最适碳源筛选分别以1%的葡萄糖、可溶性淀粉、蔗糖、麦芽糖、橄榄油+葡萄糖（3：2）代替初始发酵培养基的碳源，其他成分不变，配制成不同碳源的产酶培养基，发酵后进行酶活测定。以初始培养基中橄榄油的酶活为100%[10]。　　1.4.2最适氮源筛选以可溶性淀粉作为碳源，0.5%的酵母膏、酵母膏+蛋白胨（3：2）、蛋白胨、牛肉膏、尿素、NH4NO3、(NH4)2SO4七种有机氮源和无机氮源进行最佳氮源的筛选。以初始培养基中酵母膏的酶活作为100%。　　1.4.3最适无机盐的筛选以可溶性淀粉为碳源，酵母膏和NH4NO3为复合氮

5、源，分别以0.5%的K2HPO4、0.1%的MgSO4·7H20、0.25%和0.5%的NaCl作为无机盐进行筛选。以K2HPO4的酶活为100%。　　　　1.5实验设计　　1.5.1部分因子实验设计(FractionalFactorialDesign,FFD)蜡状芽孢杆菌（Bacilluscereus）SgSO4·7H20、NaCl和甲苯，采用6因素2水平的1/8部分因子实验设计，实验次数为8。拟合出线性方程：　　Y=a0+a1X1+a2X2+a3X3+a4X4+a5X5+a6X6(1)式中：X1、X2、X3、X4

6、、X5、X6分别为可溶性淀粉、酵母膏、NH4NO3、MgSO4·7H20、NaCl和甲苯的质量浓度(g/100mL)，Y为相对酶活力(%)，a0、a1、a2、a3、a4、a5、a6为方程系数。　　1.5.2最陡爬坡实验设计根据部分因子实验的实验结果,以拟合的一阶模型回归系数的符号和大小来设计显著因素的最陡爬坡方向及步长，通过使主要因素同时朝响应值增大的方向变化,进行最陡爬坡实验设计，找出峰值,从而逼近最大响应区域。　　1.5.3中心组合实验设计(CentralpositeDesign,CCD)[9]　　以相对酶活作为

7、响应值，采用2因素5水平的中心组合设计对影响SINITAB软件对实验进行回归分析，其中回归系数的显著性用t检验，数学模型方程的显著性用F(Fischer)检验评价，方程的拟合性由确定系数R2确定。　　　　1.6模型验证对该多元函数进行简单的性状分析便可确定出其极值点以及取得极值的相应的自变量的取值。再按照计算所得到的参数进行实验，以验证模型的可靠性，并确定最后的优化结果。　　　　2结果与讨论　　　　2.1不同碳源对发酵产酶的影响按照1.4.1的方法进行碳源筛选，结果如图1所示：由图1可知，在供试的六种碳源中，产生耐有

8、机溶剂脂肪酶相对酶活力依次为可溶性淀粉＞橄榄油+葡萄糖＞橄榄油＞麦芽糖＞葡萄糖＞蔗糖。可溶性淀粉的效果明显优于其它单一组分的碳源，故选可溶性淀粉为发酵最适碳源。　　　　2.2最佳氮源的选择按照1.4.2的方法进行最佳氮源的选择，实验结果如所示：显示的结果明，有机氮源中以酵母膏的产酶效果最佳，无机氮源以NH4NO3产酶最佳，大多数微生物更倾向利用