蜡样芽孢杆菌的检测

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1、变质食品中蜡样芽孢杆菌的检测变质食品中蜡样芽孢杆菌的检测（第一次课）蜡样芽胞杆菌概述一形态与染色本菌是革兰氏阳性杆菌，1.0~1.2μm×3~5μm,菌体两端钝圆，有鞭毛，无荚膜，多成短链状排列。本菌生长6小时以后可以既可以形成芽孢，形成的芽孢小于菌体横径，位于中心或稍偏于一端。营养要求不高，在普通培养基上可生长良好，最适宜温度为28~35℃。菌落较大，不透明，表面粗糙似毛玻璃状或蜡状，边缘常成扩展状。在普通肉汤上培养基呈浑浊生长，常形成菌膜或壁环，震摇易乳化。二培养特性三流行病学蜡样芽胞杆菌病原菌条件致病菌肠毒素耐热不耐热食物中毒人或动物非肠道传染病eg:结膜炎呕吐型污染

2、食品：米饭我国多见腹泻型污染食品：蛋白型食品及果汁欧美等国多见污染途径：泥土和灰尘昆虫不洁用具不卫生的食品从业人员实验目的1、掌握蜡样芽孢杆菌检验的主要步骤与方法。2、了解蜡样芽孢杆菌菌落特点和掌握生化反应结果的判断方法。不发酵甘露醇：在甘露醇-卵黄-多粘菌素（MYP）琼脂平板上生成微粉红色菌落。产生卵磷脂酶：分解MYP琼脂中的卵磷脂，在菌落周围产生粉红色混浊环（沉淀环）。产生酪蛋白酶：分解培养基中的酪蛋白，生成L-酪氨酸在菌落周围形成透明圈。实验原理：蜡样芽胞杆菌具有以下生化特性：产生溶血素：使胰酪胨大豆羊血琼脂（TSSB）中的血细胞发生β溶血。产生明胶酶：将明胶水解为多肽再

3、水解为氨基酸而使其由半固体转化为液态状。触酶实验:产生过氧化氢酶分解过氧化氢生成水和氧气。动力和硝酸盐试验:蜡样芽胞杆菌运动活泼,能还原硝酸盐为亚硝酸盐。实验材料甘露醇-卵黄-多粘菌素（MYP）琼脂平板营养琼脂培养基L-酪氨酸营养琼脂培养基胰酪胨大豆羊血琼脂(TSSB)动力-硝酸盐生化鉴定管木糖-明胶生化鉴定管硝酸盐试剂(1%对氨基苯磺酸溶液,0.2%α-萘胺溶液)3%的双氧水革兰染液检样50g(mL)+450mL无菌磷酸盐缓冲稀释液10-1~10-6稀释液30°C,24h形态观察菌数测定选择性培养基MYP营养琼脂30°C,24h证实试验革兰染色生长及菌落观察鉴别试验生化反应肠

4、毒素测定报告检验程序实验步骤1样品的保存和送检待检样品应保持在6℃以下运送并尽可能不使其冷冻。对可疑是该菌引起的食物中毒的病人，应取可疑食物或病患者的呕吐物、粪便，且立刻在3小时内送检。送达实验室后，应保存于4℃并尽快检验。实验步骤2：样品稀释及计数：1mL1mL1mL1mL1mL9mL9mL9mL9mL9mL各稀释度0.1mL，L型玻棒均匀涂布MYP琼脂平板计菌落数1每个稀释度混匀吹打完毕后换用另一只灭菌吸管。2每稀释度接种两个平皿。30℃，24h10-110-63分离培养计数后，从每个平板选取5个已计数的菌落分别接种于营养琼脂斜面做纯培养，30℃培养24h，进行形态观察和证

5、实试验。变质食品中蜡样芽孢杆菌的检测变质食品中蜡样芽孢杆菌的检测第二次课分类需氧芽孢杆菌根据芽孢囊膨大与否及芽孢的形状，可将其分为3个群。第一群的芽孢不突出菌体，形成的芽孢为椭圆形或圆柱形；第二类的芽孢囊突出菌体，形成的芽孢为椭圆形；第三群的芽孢囊突出菌体形成的芽孢为球形。蜡样芽胞杆菌属于第一群。该群内细菌，根据营养型细胞的宽度可以又分为两类，其中宽度≥0.9μm者称大细胞群，该群有蜡样芽胞杆菌、蕈状芽孢杆菌、紫云金芽孢杆菌、炭疽芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌。这几种与蜡样芽胞杆菌形态上相似的4个菌种必须用微生物学和生化学试验进行鉴别。4证实试验L-酪氨酸琼脂培养基预实验营养琼脂培养基

6、菌落形态观察镜检观察菌体生化实验卵磷脂酶实验L-酪氨酸分解实验动力与硝酸盐还原实验革兰染色MYP琼脂平板溶血实验胰酪胨大豆羊血琼脂平板触酶实验双氧水动力-硝酸盐生化鉴定管鉴别试验1形态观察本菌革兰染色阳性，呈短链或长链，芽孢位于菌体中央或偏端，不是菌体胀大。1MYP平板上：粉红色菌落，菌落周围产生粉红色浑浊圈。2L-酪蛋白琼脂培养基：菌落周围形成透明圈。3触酶试验：加入过氧化氢后30秒产生气泡。4TSSB平板上：菌落周围产生的β溶血圈。（在菌落周围出现一个大小不一的完全透明清楚的宽带）。紫云金芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌呈现弱得溶血现象，而炭疽芽胞杆菌通常不溶血。5动力-硝酸盐生化鉴

7、定管：细菌沿穿刺线扩散生长，加硝酸盐试剂后培养基变红。蕈状芽孢杆菌常常呈绒毛状生长，蜡样和紫云金芽孢杆菌通常运动极为活泼，而炭疽芽胞杆菌则不运动。2实验结果实验结果3计数（表面涂布法）1克样品中含的蜡样芽孢杆菌数：MYP平板上的菌落数×证实阳性菌落数挑取的菌落数×稀释倍数×10举例：将检样10-4稀释液0.1mL涂布于MYP琼脂平板上，生成的可疑菌落数为25个，取5个进行鉴定，证实为蜡样芽胞杆菌的是4个，则1g样品中含的蜡样芽孢杆菌数为（25×4/5）×104×1/0.1谢谢谢谢观赏