环境样品前处理-第6章衍生化

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1、环境样品前处理第6章衍生化技术6.1衍生化目的与条件过程：化学反应→定量转化→适于分析。定义：借助化学反应将待测组份接上某种特定基团，从而改善其检测灵敏度和分离效果的方法。作用：把难于分析的物质转化为易于分析的物质，通过对反应产物的检测间接分析目标化合物。6.1衍生化目的与条件柱前衍生化：衍生化反应→定量生成→色谱分析。柱后衍生化：色谱柱分离→衍生化反应→检测。分类：柱前衍生化和柱后衍生化。流程：机理柱前衍生化柱后衍生化分离-衍生产物检测-衍生产物检测-衍生产物分离-待测物本体衍生化6.1.1衍生化的目的提高目标物可检测性：LC:提高检测灵敏度与选择性GC:改善色谱分离，通过增强目标

2、物挥发性或者改善目标物极性提高理化稳定性为结构鉴定提供依据6.1.2衍生化的条件柱前衍生化反应需满足的条件：①反应迅速、定量、重复、条件不苛刻、易操作；②选择性高、具有专一性；③反应产物只有一种，无干扰；④衍生化试剂易得、通用性好。6.1.2衍生化的条件2.柱后衍生化反应需满足的条件：①反应迅速、定量、重复；②反应条件与色谱条件适应；③反应产物可检测；6.2.1气相色谱柱前衍生化（1）硅烷化衍生化方法（2）酯化衍生化方法（3）卤化衍生化方法（4）酰化衍生化方法方法6.2衍生化方法1.硅烷化衍生化方法本节首页退出本章质子性化合物如醇、酚、酸、胺等与硅烷化试剂反应，形成挥发性的硅烷衍生物

3、R3Si—X+H—R`R3Si—R`+H—XP135表6-12.酯化衍生化方法大多数有机酸挥发性、热稳定性差。在GC分析之前衍生为相应的酯。①甲醇法②重氮甲烷法③三氟乙酸酐法酯化反应①甲醇法本节首页退出本章甲醇法：有机酸与甲醇在催化剂的存在下加热，可以发生酯化反应，生成有机酸甲酯RCOOH+CH3OH催化剂RCOOCH3+H2O△硫酸、盐酸-加热三氟化硼BF3-室温催化剂②重氮甲烷法本节首页退出本章非水介质中CH2N2与有机酸反应，生成有机酸甲酯RCOOH+CH2N2RCOOCH3+N2重氮甲烷不稳定，有爆炸性，有毒！！③三氟乙酸酐法本节首页退出本章醇或酚与有机酸反应，生成酯：RCO

4、OH+R'OHRCOOR'+H2O适合空间位阻较大的化合物。三氟乙酸酐3.酰化衍生化方法本节首页退出本章在-OH、-SH、-NH等含有活泼氢的化合物上引入酰基→转化为弱极性的酯、硫酯或酰胺→改善挥发性和稳定性，含有卤离子的羰基基团可增强ECD响应。优点：保护不稳定基团；提高糖类，氨基酸等物质的挥发性和热稳性；有助于混合物分离；使用ECD检测，分析物检测下限可降低很多。3.酰化衍生化方法本节首页退出本章（1）乙酰化法：提高挥发性试剂：乙酸酐（AA）样品：糖类介质：多为非水催化剂：吡啶等碱性化合物3.酰化衍生化方法本节首页退出本章（2）多氟酰化法：引入卤素！试剂：三氟乙酸酐（TFA）、五

5、氟丙酸酐（PFP）、七氟丁酸酐（HFB）、N-甲基双（三氟乙酸酐）咪唑（MBTFA）、1-(三氟乙酰)咪唑（TFAI）样品：药物等大分子介质：非水4.卤化衍生化方法本节首页退出本章引入卤素→ECD检测器→改善挥发性和稳定性。（1）卤素法：加成或取代4.卤化衍生化方法本节首页退出本章（2）卤化氢法：加成或置换（3）NBS法：烯丙位取代P137HPLC化学衍生化分类在线化学衍生化★是否与HPLC系统联机离线化学衍生化柱前衍生化★发生衍生化发应的先后柱后衍生化本节首页退出本章6.2.2液相色谱柱前衍生化1.紫外衍生化反应2．荧光衍生化反应3．电化学衍生化反应优点：（1）对用作流动相的溶剂体

6、系没有限制；（2）反应条件，反应速率不受限制；（3）通过选择合适的试剂以及萃取方法，可以消除许多干扰；（4）过量溶剂、试剂容易除去；（5）转变成合适的衍生物，可使分离度改进。缺点:（1）操作过程繁琐，容易影响定量准确性。（2）当一个复杂组分样品经过衍生化反应后，有可能产生多种衍生化产物给色谱分离带来困难。本节首页退出本章（1）紫外衍生化反应液相色谱法中，紫外吸收检测器是最常见的一种高灵敏度检测器很多化合物在紫外可见光谱区无吸收与带有紫外吸收基团的衍生试剂在一定条件下发生反应，反应产物带有发色基团而能被紫外吸收检测器检测。本节首页退出本章（1）紫外衍生化反应苯甲酰氯+胺、醇、酚→苯甲酸

7、酯类衍生物（２００～３６０ｎｍ）（1）苯甲酰化反应本节首页退出本章（1）紫外衍生化反应（2）苯甲磺酰化反应（3）DNFB与醇、胺、氨基酸反应（4）PITC与氨基酸反应（5）有机酸酯化反应（6）羰基与DNPA或PNBA反应P139-140:更多反应：P137-138表6-2（2）荧光衍生化反应定义：用含有芳香环或杂环的大基团取代被测化合物分子中的一个或几个原子，以此将荧光物标记入分子，此时被测分子的结构基本不变特点：高选择性、高灵敏度荧光检测器灵敏度比紫外检