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1、大脑中动脉缺血再灌注大鼠脑组织PAR?1表达与炎症反应的关系周青珍，王华梅，吴家幂【摘要】目的:研究脑缺血再灌注（CIR）后脑组织中蛋白酶激活受体?1(PAR?1）的表达及其与炎症反应的关系。方法:40只雄性SD大鼠线栓法建立大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，再灌注后于3、6、12h及1、2、3、7d取脑，免疫组化法和脑组织匀浆法检测PAR?1、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量。结果:缺血再灌注后脑组织PAR?1表达增加（P＜0.01），MDA含量增多（P＜0.01），SOD活性降低（P＜0.01）；PAR?1表达与
2、MDA含量正相关（r1=0.844,P＜0.05），与SOD含量负相关（r2=-0.901,P＜0.01）。结论:CIR后PAR?1表达增多可加重脑组织炎性反应。【关键词】大脑中动脉;栓塞；蛋白酶激活受体?1Abstract:ObjectiveToinvestigatethecorrelationbetmatoryreactionofbraintissueaftercerebralischemiareperfusion(CIR).MethodsFourtySDratslydividedintoeightgroups:shamgro
3、up,CIR3h,CIR6h,CIR12h,CIR1d,CIR2d,CIR3d,andCIR7dgroup(n=5).Toestablishmiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)modelethods.Attheindicatedtimepoint,theratoved.PAR?1munohistochemistry,SODandMDAcontentsinbrainhomogenateeasured.Resultsparedgroup,PAR?1expressioneofCIRprolonged（P
4、＜0.01）,andthereayaggravateinflammatoryreactionofbraintissueinratsafterCIRiareperfusion,CIR）后中性粒细胞在凝血酶作用下趋化于缺血组织周围，通过激活蛋白酶激活受体-1（protease?activatedreceptor?1,PAR?1）导致细胞内Ca2+升高，刺激小胶质细胞的活化和增生[3]，促进炎症因子表达，活化的白细胞释放自由基，引起脑缺血后脑组织损害。本实验通过建立大脑中动脉栓塞（Middlecerebralarteryocclusio
5、n,MCAO）模型,了解CIR后脑组织中PAR?1表达与代表自由基水平的超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）之间的相关性，以探讨PAR?1在CIR后脑组织炎症反应中的作用。1材料和方法1.1实验动物与分组健康雄性SD大鼠40只，体重270～320g(南京青龙山实验动物养殖中心提供），随机分为8组：假手术组，缺血再灌注3、6、12h及1、2、3、7d组（n=5）。1.2脑缺血再灌注模型的制备选用日本产钓鱼尼龙线，直径0.2mm，每段长4cm，头端烧成杵状备
6、用。参照ZeaLonga报道的线栓法[1]建立大鼠大脑中动脉栓塞MCAO模型。术后2h，外拉尼龙线，使其球端回至颈外动脉残端，恢复大脑中动脉供血，实现再灌注，于上述不同时间点断头取脑；假手术组除插入尼龙线15mm外，余步骤同手术组，术后24h断头取脑。1.3免疫组化染色在相应时间点，大鼠深度麻醉后，打开腹腔，由左心耳灌注生理盐水100mL,再用4%甲醛内固定后断头取脑。标本置中性福尔马林中固定、包埋。按下述步骤行PAR?1免疫组化染色：切片、微波修复抗原、3%过氧化氢抑制、兔血清封闭、加一抗（山羊抗小鼠多克隆抗体，美国SantaC
7、ruz公司）、4℃过夜、加生物素二抗（兔抗山羊IgG）、加SABC、DAB显色，苏木素复染。1.4脑组织匀浆制备及SOD、MDA含量测定将左侧脑组织称重后置于玻璃匀浆管内,0.9%的生理盐水作为匀浆介质（是脑组织的9倍）,充分磨碎使脑组织匀浆化,离心15min,取上清液,即为10%脑组织匀浆。SOD、MDA含量测定严格按试剂盒说明书进行。(责任编辑：admin)1.5结果分析高倍镜下随机选取左侧海马皮质相邻而不重叠的4个视野区，用图像分析软件计算PAR?1阳性表达细胞数。用SPSS11.0软件进行方差分析，所得PAR?1、SOD、
8、MDA值用均数±标准差(x±s)表示，P＜0.05有统计学意义。2结果2.1PAR?1表达和SOD、MDA含量与假手术组相比，CIR3h后PAR?1表达明显增多，3d时达高峰（P＜0.01）；SOD活性显著降低（P＜0.01），且随时间变化延长而逐
