脑缺血再灌注大鼠免疫炎症反应相关探究

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1、脑缺血再灌注大鼠免疫炎症反应相关探究【摘要】目的：探讨脑缺血再灌注大鼠免疫炎症反应。方法：采用线栓法闭塞大鼠大脑中动脉造成局灶性脑缺血再灌注模型；应用苏木精-伊红染色法观察缺血侧脑组织神经元缺血坏死情况，炎症免疫反应改变，炎性细胞粘附、浸润情况。结果：免疫组化结果显示ICAM-1阳性血管表达部位主要分布在缺血侧皮层，与梗死灶周围区相一致；P-selectin阳性血管表达部位主要分布在缺血侧皮层，与梗死灶周围区相一致。结论：大鼠局灶性脑缺血再灌注后ICAM-1、P-selectin表达明显增加，提示它们共同参与缺血再灌注后炎症反应，引起缺血再灌注性脑损伤。关键词】脑缺血再灌注；I

2、CAM-1；P-selectin；炎症反应1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物:选用健康成年雄性SD大鼠，体重250300go1.1.2主要试剂和药品：2%戊巴比妥钠-生理盐水；4%多聚甲醛-PBS;抗ICAM-1羊抗鼠抗体；免疫组化二抗试剂盒；防脱片剂。1.1.3主要实验仪器：玻璃匀浆器、凝胶成像分析系统、电子天平、光学显微镜。1.2实验方法1.1.1动物分组采用完全随机的原则，将大鼠分为四组，每组10只，分组如下：正常对照组、假手术组、模型1组、模型2组。1.2.2线栓制备取4-0单股尼龙丝线40mm，直径0.23mm。1.2.3大脑中动脉栓塞(MCA0)模型制作参

3、照ZeaLnoga等方法稍加改进，行右侧MCA0手术。于缺血2小时后拔出栓线，建立缺血再灌注模型。整个手术过程采用体表加热/制冷将肛温控制在36.5〜37.5°C范E内，同时将环境温度控制在25〜30°C左右。1.2.4神经症状行为学检测依据Zealonga及Bederson等确定的5级评分方法进行神经功能评分。1.2.5操作方法正常组：与其它各组同时期常规饲养。假手术组：大鼠麻醉切开颈部皮肤后，仅分离CCA及ICA至PPA，不插线栓。模型组：将手术后造模成功，即神经功能评分在2〜3分归入模型1组和模型2组，缺血2h后，按各组要求分别再灌注6h和24ho1.2.6取材各组动物在

4、规定时间的手术观察完成后，于再灌注后各时间点以2%的戊巴比妥钠过度麻醉，迅速断头取脑，每组各取3例在冰盘上自大脑中动脉梗死区中心为起始点前后做约4mm厚的冠状切片，投入20%中性福尔马林固定液中固定，以做病理组织切片HE染色。1.2.7指标检测与方法：缺血再灌注侧脑组织病理切片观察；ICAM-1、P-selectin的免疫组化染色。1.2.8数据处理和统计学分析：采用SPSS（10.00版）统计软件包进行统计，所有数据采用平均数土标准差（M土SD）表示。各组组间差异采用单因素方差分析，继以LSD检验，以P