大鼠缺血再灌注损伤相关

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1、缺血再灌注损伤模型的建立及药物处理对损伤保护机制探讨讨论时间：2011年11月30日星期三讨论地点：逸夫楼417讨论人员：09基础医学专业小组成员：90905113刘亮（主讲）90905106于震维90905107何博90905115王小杰90905116朱枫讨论内容：如下讨论形式：PPT展示，同学提问1.背景：1)introduction：良好的血液循环是组织细胞获得充足的氧和营养物质并排出代谢产物的基本保证，任何原因造成的组织血液灌流量减少均可使细胞发生缺血性损伤。因此，尽早恢复缺血器官的血液再灌注是减少器官缺血性损伤的根本措施，近年来广

2、泛开展的药物溶栓、经皮腔内冠脉成形术、冠脉搭桥术等治疗手段的目的均在于恢复对缺血器官的再灌注。人们发现，当心肌较长时间缺血后再灌注非但没有减轻缺血损伤，反而扩大了缺血性损伤的范围，或者使缺血组织器官由可逆性损伤转化为不可逆性损伤，出现明显的功能障碍。这种缺血器官在恢复血液灌注后缺血性损伤的进一步加重的现象，称为缺血—再灌注损伤（ischemia-reperfusioninjury）。2)Influencefactorsofischemia-reperfusioninjury:a)Durationofischemia:阻断狗冠脉左旋支15-20

3、min后再灌注，室颤率高达25%~50%。一般15min~40min效果较好。b)Conditionsofreperfusionfluid:钙反常、氧反常、PH反常c)Functionalstateoforgansbeforeischemia:再灌注前组织器官的能量储备及血液循环侧支代偿情况。严重的心肌肥厚、广泛性冠脉病变等，因心肌ATP严重贮备不足或Ca2+的转运障碍，较易发生ischemia-reperfusioninjury。1)Mechanismsofischemia-reperfusioninjury：a)Injuryoffreer

4、adicalsu膜脂质过氧化作用增强：膜通透性↑，正常结构破坏；蛋白质功能抑制；ATP生成减少。u蛋白质变性和酶活性降低。uDNA断裂和染色体畸变。u诱导炎性因子产生：膜脂质过氧化后激活膜磷脂酶、脂加氧酶和环加氧酶，通过花生四烯酸代谢，生成具有高度生物活性的白三烯、PG、TXA2等；激活核转录因子，促进粘附分子的表达。b)Calciumoverloadc)Interactionbetweenendothelialcellsandneutrophils1.实验目的：复制实验动物模型对于研究缺血—再灌注损伤的病生理机制和防治措施具有重要意义。大鼠

5、因其冠状动脉侧支少、来源广、价格低廉而成为复制心肌缺血再灌注损伤模型的常用动物。不同实验室复制方法和评价指标不尽相同。本实验结合北医学校实验室实际情况，复制大鼠心肌缺血—再灌注损伤离体模型，从心功能、心肌梗死面积、心肌损伤标志物和氧化应激相关指标等方面评价其成功率和有效性。2.材料与方法：1)动物与分组：清洁级SD大鼠24只，体重250g左右，雄性，随机分成四组，每组6只，A组为假手术组（暴露心脏不结扎），B组为心肌缺血再灌注模型组，C组为依达拉奉处理组，D为益赛普处理组。2)仪器与试剂：大鼠急性手术器械一套、MacLab仪，20%乌拉坦、1

6、%肝素、生理盐水、依达拉奉、益赛普、人工呼吸机，日立全自动生化分析仪。3)模型建立：i.大鼠称重，腹腔注射20%乌拉坦，麻醉后固定于鼠板上，上腹部及胸部剪毛。ii.切开气管，呼吸机人工呼吸，呼吸频率为60次/分。iii.舌下静脉注入1%肝素，切开胸腹部皮肤，用剪刀横行剪开腹腔，向上剪断膈膜，沿两侧肋骨向上平行剪开，翻起前胸壁，把心脏及胸膈周围的结缔组织拨到一侧，充分暴露心脏。iv.于左心耳下缘约1mm处用6号医用缝针和0号医用缝线穿过心肌浅层作一结扎线，稳定10min左右行实验处理。结扎左冠状动脉前降支，结扎时用一细小硅胶管垫于血管与结扎线之

7、间，心肌缺血30min后放松结扎线，使心肌再灌注120min。假手术组穿线不结扎，旷置150min。4)药物干预：i.C组于结扎左冠状动脉前降支30min后，立即舌下静脉注射溶解于生理盐水中的药物依达拉奉（自由基清除剂）；ii.D组于结扎左冠状动脉前降支30min后，立即舌下静脉注射溶解于生理盐水中的药物益赛普（重组Ⅱ型TNFα受体-抗体融合蛋白）；iii.假手术组与模型组在相同时间点舌下静脉给予等量的生理盐水。实验中以结扎左冠状动脉前降支后左心室前壁出现紫绀为结扎成功的指标。5)检测指标：i.心功能检测：缺血前将大鼠麻醉，颈部正中切开，暴露

8、并钝性分离左颈总动脉，用肝素(5mL/kg)静脉注射肝素化后，将导管插入左颈总动脉，导管另一端连接压力传感器，通过BL-420E+型生物信号采集和处理系统记录左室收