博莱霉素诱导大鼠肺纤维化过程中羟脯氨酸及氧化应激指标的变化

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1、博莱霉素诱导大鼠肺纤维化过程中羟脯氨酸及氧化应激指标的变化：刘瑞，李成刚，梁欣，海春旭【关键词】肺纤维化　　【Abstract】AIM:Todiscussthechangesofhydroxyprolineandtheroleofoxidationantioxidationdisequilibriuminpulmonaryfibrosisinducedbybleomycin(BLM)inrats.METHODS:AsingledoseBLMonaryfibrosisinrats,soastoobservethechangesoftissuehydroxy

2、prolineandoxidativestressmarkersduringtheprocess.Theanimalsodelethod,andthehydroxyprolineoflungtissueined.Atthesametime,malonaldehyde(MDA)content,superoxidedismutase(SOD)activity,reducedglutathione/oxidizedglutathione(GSH/GSSG)ratiooflungtissue7dto28d,thehydroxyprolineoflungtissu

3、earkerofBLMinducedpulmonaryfibrosis.Theoxidationantioxidationdisequilibriumofcellsandmatrixmayplayaroleinthepathologicalprocess.　　【Keyonaryfibrosis;hydroxyproline;oxidativestress　　【摘要】目的：观察博莱霉素诱导的肺纤维化模型中组织羟脯氨酸(Hyp)及各氧化应激指标的变化，探讨氧化抗氧化失衡在该病发生发展中的作用.方法：二级SD大鼠40只，随机分为模型组与对照组，每组20只.气管

4、内注入博莱霉素A5（BLMA5）溶液，建立肺纤维化模型.分别于3，7，14和28d每组随机抽出5只，处死后取肺脏行HE,Masson染色鉴定模型并测定Hyp含量.同时分别以八木国夫荧光法测定肺组织脂质过氧化产物（MDA）；改良盐酸羟胺法测定组织总超氧化物歧化酶（SOD）的酶活力；改良荧光法测定还原型谷胱甘肽（GSH）含量；荧光法测定氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量.并计算GSH/GSSG值.结果：成功建立博莱霉素诱导的肺纤维化模型.各指标在不同时间点出现变化.模型组Hyp含量于7d时高于对照组，28d达到最高（P<0.05）.模型组MDA含量随时间延

5、长而增加，其中14d时显著高于对照组（P<0.05），但在28d时有下降.SOD活力在7d,14d均降低，28d时上升.模型组GSH/GSSG在3d,7d显著低于对照组（P<0.05），14d,28d又回升.结论：Hyp可作为博莱霉素诱导的肺纤维化的一个指标.博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化伴有氧化损伤，且在不同阶段细胞内、外的氧化抗氧化出现失衡.　　【关键词】肺纤维化；羟脯氨酸；氧化应激　　0引言　　肺纤维化是一组由多种病因所引起的肺破坏性疾病,目前的治疗方法尚不能改善其不良的预后，加强对肺纤维化机制的研究，并在此基础上发展新的治疗策略已成为更加

6、迫切的现实需要.一般认为，在肺部，损伤组织及激发纤维化的主要病理机制在于炎症和免疫反应，但是大量研究表明，氧自由基在炎症和免疫介导的组织损伤中扮演了重要角色［1］.故本研究通过建立博莱霉素诱导的肺纤维化模型，观察各氧化指标在此过程中的变化，从自由基理论的角度，深入探讨氧化抗氧化失衡在该病发生发展中的重要作用.　　1材料和方法　　1.1材料　　博莱霉素A5，天津太河制药有限公司产品（批号：030305），8mg/支.丙二醛（MDA）标准品（Merk公司）;2Thiobarbituricacid（Merk公司）;磷钨酸（中国医药集团上海化学试剂公司）;盐酸羟

7、胺（AR,天津化学试剂一厂）;氯化硝基四氮唑蓝，NBT，NEMI（华美公司）;TritonX100（上海试剂一厂）;7210分光光度计(上海分析仪器厂虹桥分厂);970CRT荧光分光光度计（上海分析仪器总厂）;GL20A全自动高速冷冻离心机（湖南仪器仪表离心机厂）.　　二级SD大鼠40只，雄性，体质量180~240g，由第四军医大学实验动物中心提供.随机分为模型组与对照组，每组20只.　　1.2方法　　1.2.1制备模型［2］以10g/L戊巴比妥钠（10mg/kg,ip）麻醉大鼠，取仰卧固定位，常规消毒，行颈部正中切口，钝型分离暴露气管，于气管软骨环间隙

8、穿刺注入BLMA5生理盐水溶液0.2～0.3mL（5mg/kg），立即将动物直立