博莱霉素诱导大鼠肺纤维化过程中羟脯氨酸及氧化应激指标的变化论文

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1、博莱霉素诱导大鼠肺纤维化过程中羟脯氨酸及氧化应激指标的变化论文刘瑞，李成刚，梁欣，海春旭【关键词】肺纤维化【Abstract】AIM:Todiscussthechangesofhydroxyprolineandtheroleofoxidationantioxidationdisequilibriuminpulmonaryfibrosisinducedbybleomycin(BLM)inrats.METHODS:AsingledoseBLMonaryfibrosisinrats,soastoobservethechangesoftissuehydroxyprolineandox

2、idativestressmarkersduringtheprocess.Theanimalsodelethod,andthehydroxyprolineoflungtissueined.Atthesametime,malonaldehyde(MDA)content,superoxidedismutase(SOD)activity,reducedglutathione/oxidizedglutathione(GSH/GSSG)ratiooflungtissue7dto28d,thehydroxyprolineoflungtissuearkerofBLMinducedpulmo

3、naryfibrosis.Theoxidationantioxidationdisequilibriumofcellsandmatrixmayplayaroleinthepathologicalprocess.【Keyonaryfibrosis;hydroxyproline;oxidativestress【摘要】目的：观察博莱霉素诱导的肺纤维化模型中组织羟脯氨酸(Hyp)及各氧化应激指标的变化，探讨氧化抗氧化失衡在该病发生发展中的作用.方法：二级SD大鼠40只，随机分为模型组与对照组，每组20只.气管内注入博莱霉素A5（BLMA5）溶液，建立肺纤维化模型.分别于3.freel

4、g/支.丙二醛（MDA）标准品（Merk公司）;2Thiobarbituricacid（Merk公司）;磷钨酸（中国医药集团上海化学试剂公司）;盐酸羟胺（AR,天津化学试剂一厂）;氯化硝基四氮唑蓝，NBT，NEMI（华美公司）;TritonX100（上海试剂一厂）;7210分光光度计(上海分析仪器厂虹桥分厂);970CRT荧光分光光度计（上海分析仪器总厂）;GL20A全自动高速冷冻离心机（湖南仪器仪表离心机厂）.二级SD大鼠40只，雄性，体质量180~240g，由第四军医大学实验动物中心提供.随机分为模型组与对照组，每组20只.1.2方法1.2.1制备模型［2］以10g/L戊

5、巴比妥钠（10mg/kg,ip）麻醉大鼠，取仰卧固定位，常规消毒，行颈部正中切口，钝型分离暴露气管，于气管软骨环间隙穿刺注入BLMA5生理盐水溶液0.2～0.3mL（5mg/kg），立即将动物直立并行旋转，缝合皮肤，待动物自然清醒后置笼内常规饲养.对照组(假手术组)以等容量生理盐水(NS)注入气管代之.1.2.2模型鉴定分别于气管内滴药后第3，7，14和28日处理.每批每组随机抽出5只，麻醉处死.①剖开胸腔及颈部，分离气管和肺脏，结扎后取出肺脏，洗去血渍，去除结缔组织，吸干水分；②从气管插管至左主支气管，结扎固定.分离结扎右主支气管后离断，取右上叶置体积分数为40g/L甲醛中

6、固定1ol/LHCl(AB1.0mL，于80℃水浴中保温10min，显色完全后，自来水(25℃)冷却5min.最后用7210分光光度计在560nm波长比色，测量其吸光度A值，用下式计算Hyp含量：肺组织Hyp含量(mg/g)＝(0.5×A样/A标)／m.其中，A样为样品管吸光度，A标为标准管吸光度，m为肺重.1.2.4氧化损伤指标的测定剪取左肺，称质量，按1∶5加入生理盐水制备匀浆.3000r/min离心10min，取上清，冻存备用.分别以八木国夫荧光法［5］测定肺组织脂质过氧化产物（MDA）；改良盐酸羟胺法［6］测定组织总SOD的酶活力；改良荧光法［7］测定还原型谷胱甘肽（

7、GSH）；荧光法［7］测定氧化型谷胱甘肽(GSSG).并计算GSH/GSSG值.统计学处理：数据均以x±s表示.采用SPSS11.0统计软件包进行分析，采用成组t检验，方差不齐时用t′检验.P0.05为有显著性差异.A:ControlgroupHE×100;B:BLMgroupHE×100;C:ControlgroupMasson×100;D:BLMgroupMasson×100.2结果2.1大体形态观察对照组双肺呈粉红色，表面光滑，弹性良好.模型组3d未见有明显改变，而7d见双肺有点状出血、灶状瘀斑.