cgrp在大鼠肺动脉高压血管重构和博莱霉素诱导肺纤维化中的作用及机制

《cgrp在大鼠肺动脉高压血管重构和博莱霉素诱导肺纤维化中的作用及机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号VDC博士学位论文密级CGRP在大鼠肺动脉高任血管重构和博莱霉素诱导肺纤维化中的作用及机制Theroleofcalcitoningene—relatedpeptideinvascularremodelin2ofpulmonaryarterialhypertensionand一一^一·’’‘●bleomycin—inducedpulmonaryfibrosisinrats作者：学科专业：学院(系、所)：导师：李先伟药理学中南大学药学院李元建论文答辩日期幽；!；：兰2答辩委员会主席中南大‘学二0一二年五月·长沙原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究

2、成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：擞日期：趁年』月翌日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信

3、息服务。作者签名：耋丝址导师签名业日期：盈丝年三月翌日中文摘要摘要第一章降钙素基因相关肽在大鼠肺动脉高压血管重构中的作用及机制研究背景肺动脉高压(pulmonaryarterialhypertension，PAH)是以肺动脉压力增高为主要特征的一类进行性疾病，其发病机制至今仍未完全阐明。血管重构是PAH发生发展的重要病理生理机制，而肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryartefialsmoothmusclecells，PASMCs)的过度增殖是引起血管重构的关键因素。血管平滑肌细胞增殖受细胞周期蛋白(cyclin)及其依赖性蛋白激酶(CDK)和CDK抑制因子(CDKI)的共同调控。p27作为

4、一种CDK抑制因子，也参与了PASMCs增殖的调控。研究证明，在低氧性PAH大鼠肺动脉p27的表达明显下调。体外实验也证明，上调或过表达p27均能够抑制PASMCs的增殖。p27对细胞增殖的调控涉及细胞外信号调节蛋白激酶1／2(ERKl／2)信号途径，被激活的ERKl／2磷酸化而降解。降钙素基因相关肽(calcitoningenerelatedpeptide，CGRP)是感觉神经的主要递质，其水平降低可能是促进PAH血管重构的原因之一，因为在PAH动物模型中血浆CGRP水平降低，而外源性给予CGRP或过表达CGRP均可显著缓解肺动脉高压的症状。此外，细胞博士学位论文中文摘要实验也证明，过表达

5、CGRP能够抑制血清诱导PASMCs的增殖。然而，CGRP抑制肺血管重构的机制尚未明了。我们以前的研究证明，CGRP能明显抑制AngII诱导的主动脉血管平滑肌细胞(ASMCs)的增殖，其机制与其抑制ERKl／2信号通路有关。因此，我们推测CGRP可能通过ERKl／2／p27信号通路参与了PAH血管重构的调节。方法采用低氧00％02)诱导PAH大鼠模型。低氧前4天大鼠皮下注射辣椒素(50mg／kg／d)，用以耗竭内源性CGRP。右颈外静脉插管测定右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(mPAP)。分离右心室(RV)、左心室加室间隔(LV+S)并称重，计算RV／(LV+S)比值。放射免疫法测定血

6、浆CGRP含量。提取肺动脉RNA或蛋白，real-timePCR或WesternBlot检测CGRP、p27、磷酸化ERKl／2(p—ERKl／2)、c．fos及c-myc的表达。4％多聚甲醛固定左肺，石蜡包埋，进行HE或免疫组化染色。大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)采用组织块贴壁法制备。3％02刺激细胞增殖。不同浓度CGRP(1、10、100nM)及CGRP受体阻断剂CGRP8-37(1¨M)预孵育1h，然后低氧处理48h。BrdU法和流式细胞术检测细胞增殖，real．timePCR或WesternBlot检测p27、p-ERKl／2、c-fos及c—myc的表达。小分子干扰RAN(s

7、iRNA)细胞转染。当PASMCs汇合达到70％'--"80％后，采用lipofectamin2000转染试剂将p27siRNA干扰片段转入细胞，干扰p27的表达。Real．timePCR或WestemBlot检测干扰效率。中文摘要干扰24h后加入CGRP(100nM)继续低氧处理48h。BrdU法和流式细胞术检测细胞增殖，real．timePCR或WesternBlot检测p27、p-ERKl／2、c—fo