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时间:2018-05-06
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1、结缔组织生长因子单链抗体对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化程度及羟脯氨酸含量的影响:刘朝朝,王西华,吴国球,苟丽霞【摘要】目的:研究结缔组织生长因子(CTGF)单链抗体(ScFv)对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠的治疗作用。方法:昆明小鼠36只,随机分为对照组、模型组和治疗组,每组12只;对照组气管内滴入生理盐水,模型组和治疗组气管内滴入博莱霉素(5mg·kg-1)制备肺纤维化模型。第2天开始治疗组尾静脉注射ScFv(4mg·kg-1),对照组和模型组给予等量的生理盐水(约100μl·次-1),3次·周-1。第14、28天分两批处理动物,用HE染色行病理组织学检查并进行纤维
2、化分级,用酸水解法测定肺组织羟脯氨酸的含量。结果:对照组小鼠肺组织无纤维化形成;模型组肺组织可见肺泡破坏,肺泡间隔大量纤维化,肺组织中羟脯氨酸含量及纤维化程度较对照组明显增高(P<0.01)。治疗组肺组织纤维化程度较模型组明显减轻,且羟脯氨酸含量较模型组显著降低(P<0.01)。结论:ScFv作为CTGF单链抗体可明显减轻纤维化程度,有可能成为治疗肺纤维化一种新的药物。【关键词】结缔组织生长因子单链抗体;羟脯氨酸;肺纤维化;小鼠 [Abstract]Objective:Toinvestigatetherapeuticeffectofsinglech
3、ainvariablefragment(ScFv)againstconnectivetissuegrouthfactor(CTGF)onbleomycininducedpulmonaryfibrosisofKunmingmice.Methods:36Kunmingmicelydividedintothreegroups:thecontrolgroup,themodelgroupandthetreatmentgroup,12ratsineachgroup.Miceinthecontrolgroupalsalineviatrachea,miceinthemodela
4、ndtreatmentgroupycin(5mg·kg-1)viatracheaforpreparingmodels.Then,micethetreatmentgroupg·kg-1)viaintravenous,andthemiceintheothergroupsalsaline(about100μl·time-1)viaintravenous,3times·odeled14and28days,dealingalsbyhematoxylineosinstainingforhistopathologicalexaminationandfibrosisgrade,
5、byacidhydrolysisforassayinglunghydroxyprolinecontent.Results:Thereonaryfibrosisinthecontrolgroup;inthemodelgroup,alargenumberofalveolusdamaged,alveolarseptumfibrosis,hydroxyprolinecontentandfibrosisentgroup,lungfibrosisodelgroup(P<0.01).Conclusion:ScFvagainstCTGFcandelaythefibrosis
6、,aybeeaneonaryfibrosis. [Keyentagainstconnectonaryfibrosis;mice 肺纤维化是严重威胁人类健康的致死性肺部疾病,病人平均生存时间为3~5年。目前特发性肺纤维化病人呈逐年增多的趋势[1-3],其病变以肺间质中间质细胞的异常增殖、弥漫性或局限性成纤维细胞灶(主要由成纤维细胞和肌成纤维细胞组成)的存在为主要病理特征。研究证实成纤维细胞灶的数量与肺功能的减退、病情的进展和预后密切相关[4]。目前尚无有效的内科治疗手段可以逆转或者缓解自然病程的进展。鉴于结缔组织生长因子(connectivetissuegrog
7、·支-1),为日本化药株式会社产品;ScFv由本实验室通过基因工程技术获得;羟脯氨酸试剂盒由南京建成生物技术研究所生产。 1.2肺纤维化模型制作及标本采集 参照文献[5]报道制作小鼠肺纤维化模型。实验小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组12只。对照组小鼠予50μl生理盐水气管内滴入,模型组和治疗组小鼠予博莱霉素(5mg·kg-1)缓慢气管内滴入。第2天开始,治疗组小鼠尾静脉注射ScFv(4mg·kg-1),模型组及对照组小鼠尾静脉注射等量生理盐水(约100μl·次-1),3次·周-1。3组小鼠分别于第14、28天,通过腹主动脉放血各处死6只。开胸取肺,将右
8、下肺以10
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