细辛脂素联合受体脾细胞诱导心脏移植免疫耐受的研究

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1、细辛脂素联合受体脾细胞诱导心脏移植免疫耐受的研宄【摘要】目的：本实验通过术前7日和术前3曰输注不同剂量供者脾细胞于受体胸腺内，联合中药细辛中的细辛脂素成分，探讨其对心脏移植免疫耐受的诱导，并对诱导效果加以比较。方法：提取中药细辛中的细辛脂素成分。健康雄性Wistar大鼠（供体）和SD大鼠（受体）各80只随机配对，建立大鼠腹部异位心脏移植模型，将接受心脏移植的SD大鼠分成5组：A组：阳性对照组，行腹部异位心脏移植，不给任何处置；B组：细辛脂素组：行腹部异位心脏移植，术前7天开始灌服细辛脂素25mg?kg-l?d-l;C组：脾细胞诱导组1，术前7天开始输注供者脾细胞于受体胸腺内；D组：脾细胞

2、诱导组2，术前7天开始输注供者脾细胞于受体胸腺内，术前7天开始灌服细辛脂素25mg?kg-l?d-l;E组：脾细胞诱导组3,术前3天开始输注供者脾细胞于受体胸腺内，术前7天开始灌服细辛脂素25mg?kg-l?d-l。每组各8只术后第7天处死。另外8只用于观察移植物生存天数。噻哇蓝（MTT）法检测供受体混合淋巴细胞反应；应用ELISA法检测受体血清中IL-2、IFN-y、IL-4和IL-10水平；结果：1、免疫诱导组联合细辛脂素组(D组和F组)移植心存活时间较阳性对照组显著延长(P【关键词】细辛脂素;心脏移植;脾细胞;细胞因子;免疫耐受【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】10

3、08-6455(2011)12-0019-02TheInductionofImmuneToleranceinRatsCardiacAllograftbyAsarininCombinedwithsplenocyteZhangLiliWangXiaoyunChenYanjunletal.[AbstractlObjective:Tostudytheeffectofimmunetoleranceinratscardiacallograftinducedbydonorsplenocyte7daysandldaybeforeoperationcombinedwithAsarinin.Methods:

4、Toextracttheasarininfromherbaasari.The80SDrats(receptor)and64wistarrats(donor)weredividedintofivegroups:groupA(controlgroup);groupB(Asarinintreated7daysbeforeoperation);groupC(splenocytetreated7daysbeforeoperation);groupD(splenocytetreated7daysbeforeoperationandAsarinin);groupE(splenocytetreated3

5、daysbeforeoperationandAsarinin).Someweretoexaminesurvivaltime(n8)andothersweretoobservemixedlymphocytereaction(MLR)betweenthedonorandreceptorwithMTT;thelevelofIL-2,IFN-yJL-4andIL-10inserumwithELISApostoperatively7days(n8).Result:1.AllograftssurvivaltimeisprolongedingroupDandE(PHl3:取产自黑龙江的中药材辽细辛，购

6、自黑龙江省中药联营公司，鉴定师黑龙江省中医药大学王栋教授。采用常用的方法提取中药细辛中的细辛脂素成分，经鉴定细辛脂素纯度达95%以上，将提取的细辛脂素与橄榄油以500mg/100ml比例配成悬浊液。1.2大鼠腹部异位心脏移动物模型和免疫耐受诱导模型制备1.2.1实验动物:受体大鼠健康雄性SD系大鼠，体重200—250g，供体大鼠健康雄性Wistar系大鼠，体重150—200g。由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供。采用大鼠的同种异体腹部异位心脏移植术。供、受体均为无菌手术。供心的主动脉和肺动脉分别与受体的腹主动脉和下腔静行端個I］吻合。1.2.2主要试剂和试剂盒:高钾停跳液：哈医

7、大二院心外科提供。供心保存平衡液：林格氏液。CsA：新山地明(瑞士山德士药厂生产)生理盐水稀释成lmg/ml，4°C保存备用。噻哇蓝(MTT)：购自美国Sigma公司。试剂盒:IL-2、IFN-丫、IL-4和IL-10EUSA检测试剂盒购自深圳晶美公司。按试剂盒说明操作。1.2.3供体脾细胞悬液的制备方法:取Wistar大鼠80只，与SD大鼠80只随机配对。移植前7天，Wistar大鼠用1%戊巴比妥钠按40mg/kg腹腔注射麻醉后，