大鼠急性胰腺炎血清中il6浓度的动态变化

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1、大鼠急性胰腺炎血清中IL6浓度的动态变化【关键词】胰腺炎急性坏死性白细胞介素6血清学病理状态解剖学急性胰腺炎(acutepancreatitis,AP)是临床内、外科常见的急症之一。病理上分为水肿型和出血坏死型，临床上又分为轻型AP（MAP）和重症急性胰腺炎(severeacutepancretitis,SAP)，大约20%的轻型急性胰腺炎患者会发展成为重症急性胰腺炎，而SAP往往合并严重的并发症及较高的死亡率[1]。AP的发病机制至今尚未完全明了,研究认为,AP的发生发展与胰酶的异常激活引起胰腺细胞的“自身消化”外，还与细胞因子的过度释放,胰腺微循环障碍,胰腺腺泡细胞坏死及凋亡等诸多

2、机制有关[2，3]。细胞因子等炎症介质启动全身炎症反应,被认为是SAP从局部病变迅速发展为全身性损害的重要因素，越来越多的证据表明，细胞因子在AP的发病过程中发挥着重要的作用[4]。2008年5月～2008年10月,研究大鼠AP不同时期外周血中IL6浓度变化及相应的胰腺病理改变,对IL6与AP严重程度的相关性进行初步探讨，进一步阐明AP的发病机制。1材料与方法1.1材料1.1.1动物及分组健康成年SD大鼠60只（由贵阳医学院实验动物中心提供），雌雄不限，体重为(250±30)g,标准棒状饲料喂养，大鼠随机分为2组，假手术组和AP组，每组30只。1.1.2试剂及仪器EILSA试剂盒(由

3、天津灏阳生物有限公司提供)，全自动酶标仪(Metertech∑960)，显微镜(OLYMPUS100)。1.2实验方法1.2.1动物模型的制备采用改良十二指肠闭襻法制作AP模型[5]，该模型与人体胆汁返流性AP相类似，手术造成十二指肠腔内压力增高,使胆汁返流入胰管诱发AP。假手术组大鼠开腹后，胃窦部做小切口，并缝合关闭腹腔。麻醉清醒后大鼠可以自由饮水。1.2.2观察指标与检测法两组大鼠分别于术后6、12、24h分批处死，每批10只，经颈静脉取血2.0ml，1500r/min离心5～10min，取分离血清-70℃保存备用。用酶联免疫吸附法（EILSA）检测血清中IL6浓度，检测方法严格按

4、照说明书进行。1.2.3胰腺组织的病理检查及评分各组在规定时间内处死大鼠，肉眼观察胰腺组织的大体病理改变。取胰腺组织用10%甲醛溶液固定，石腊包埋、切片及HE染色，在光镜下观察并盲法病理评分，按Kusske等[6]标准进行病理学分级，分为水肿、出血、坏死及中性粒细胞浸润4项，程度逐项按其正常（0分）至最重（4分），共分为5级，得分越高，胰腺组织的病理改变越重。分级标准见表1。贵阳医学院学报34卷2期田宇等大鼠急性胰腺炎血清中IL6浓度的动态变化表1胰腺组织病理评分标准评分水肿出血坏死炎性细胞浸润0无无无无1小叶间灶性水肿实质出血面积<25%导管周围坏死<5%局限导管内2小叶

5、间弥散性水肿实质出血面积25%～50%灶性坏死5%～20%实质内浸润<50%3小叶广泛分隔实质出血面积51%～70%弥散性实质坏死21%～50%实质内浸润51%～75%4全小叶分隔全小叶出血严重小叶丧失>50%形成脓肿1.2.4统计学处理以SPSS11.50软件包进行统计处理，用方差分析及SNK(StaeleatNeanKeAP），术后24h为重型胰腺炎（SAP）。光镜下可见，AP组6h胰腺轻度水肿，间质和腺泡内有中性粒细胞浸润；12h胰腺实质内大量炎性细胞浸润，并见少量出血和坏死，小静脉扩张，红细胞沉积；24h胰腺血管破坏明显，大片胰腺结构消失，大量红细胞沉积，中性粒细

6、胞和淋巴细胞浸润明显增加，实质局灶性坏死、出血及脂肪坏死增加。AP组与假手术组各时间点相比均有统计学差异(P<0.01),见表2。表2大鼠血清IL6的含量和病理评分注：(1)与假手术组比较，P<0.01;(2)与AP组24h比较，P<0.01;(3)与AP组12h比较,P<0.05。2.4IL6与病理评分的相关性随病理评分增高，IL6浓度越高，血清IL6含量与病理评分呈正相关，r=0.774,P<0.01。3讨论急性胰腺炎的发病机制尚不明确，随着研究深入，细胞因子和炎症反应失衡理论的重要性已得到公认，细胞因子水平可用于判断AP的病情及预后，其表达水平

7、与AP发生及发展密切相关。急性胰腺炎时，胰腺蛋白酶的活化及胰腺微循环障碍可刺激粒细胞、巨噬细胞和血管内皮细胞释放IL6等细胞因子，当AP患者合并严重感染出现内毒素血症时，这些炎症递质的释放更为强烈，产生更为严重的局部及全身炎症反应和组织损伤，可使胰腺从水肿向坏死型发展。IL6是一种重要的急性反应期炎症介质，受内毒素、IL1和TNFα等刺激后可由单核细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞、纤维母细胞、平滑肌细胞等多种细胞产生并释放；IL