不同来源降香中柚皮素与异甘草素含量的高效液相色谱测定

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1、不同来源降香中柚皮素与异甘草素含量的高效液相色谱测定孙丽丽，王蕾，郭丽冰，沈志滨【摘要】目的建立高效液相色谱（HPLC）法测定降香中柚皮素和异甘草素含量的方法，比较不同来源的11批降香药材中的柚皮素和异甘草素的含量。方法采用HPLC法测定，以甲醇-0.2%磷酸水(60∶40)为流动相，检测波长为372nm（柚皮素）和290nm（异甘草素）。结果柚皮素在0.948～4.740μg范围内线性关系良好，r=0.9999；异甘草素在1.432～10.024μg范围内线性关系良好，r=0.9999。降香中的柚皮素

2、含量在2.585～5.429mg/g之间；异甘草素含量在7.526～28.329mg/g之间。结论不同来源的降香药材中的柚皮素和异甘草素含量差异较大。该方法操作简便、快速、重复性好，适用于降香的质量控制。【关键词】高效液相色谱法；降香；柚皮素；异甘草素　降香LignumdalbergiaeOdoriferae主要含有挥发油和黄酮类成分。《中国药典》中对于降香的质量控制仅限于规定降香醇溶性浸出物不得少于8.0%〔1〕，但是对单一成分未有明确的定量方法。本课题组对降香黄酮类成分进行了研究，从中分离得到7个化

3、合物〔2〕。本文用自制的柚皮素和异甘草素为指标，建立HPLC含量测定方法，并测定了11个不同来源的降香药材中的柚皮素和异甘草素含量。　　1仪器与试药　　R鉴定结构，HPLC检测，面积归一化法计算，纯度大于98%）；甲醇为色谱纯、乙醇等试剂为分析纯。　　本实验所用降香样品的来源见表1。表1不同来源降香样品（略）　　2方法与结果　　2.1对照品溶液的制备精密称取柚皮素对照品4.74mg于5ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，配制成质量浓度为0.948mg/ml溶液，再经0.45μm滤膜滤过得柚皮素对照品溶液

4、。　　精密称取异甘草素对照品7.16mg于5ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，配制成质量浓度为1.432mg/ml溶液，再经0.45μm滤膜滤过得异甘草素对照品溶液。　　2.2供试品溶液的制备按照正交实验的结果，精密称取各样品粗粉2g，在90℃下用70%乙醇提取3次，1.5h/次，合并提取液，蒸干。残留物用70%乙醇溶解并定容至25ml。经0.45μm滤膜滤过得供试品溶液。　　2.3HPLC含量测定　　2.3.1色谱条件色谱柱为迪马公司DiamonsilC18(200mm×4.6mm，5μm)色谱柱；

5、流动相为甲醇-0.2%磷酸水(60∶40)；体积流量为1.0ml/min；柚皮素的检测波长为372nm，异甘草素的检测波长为290nm；进样量为10μl；柱温30℃。　　2.3.2检测波长的确定紫外扫描柚皮素对照品溶液显示其最大吸收在372nm处，异甘草素对照品溶液最大吸收为290nm。因此以此波长作为含量测定的检测波长。　　2.3.3线性关系考察柚皮素工作曲线：按“2.3.1”项下色谱条件，分别吸取柚皮素对照品溶液1，2，3，4，5μl进样测定，记录峰面积，结果见表2。以峰面积×10-6为纵坐标，样品

6、量为横坐标绘制标准曲线并计算得回归方程为Y=5.5706X-1.8206，r=0.9999，线性范围是0.948～4.740μg。表2柚皮素进样量与峰面积（略）　　异甘草素工作曲线：按“2.3.1”项下色谱条件，分别吸取异甘草素对照品溶液1，2，3，4，5，7μl进样测定，记录峰面积。结果见表3。以峰面积×10-6为纵坐标，样品量为横坐标绘制标准曲线并计算得回归方程为Y=3.5218X-1.5752，r=0.9995，线性范围是1.432～10.024μg。表3异甘草素进样量与峰面积（略）　　2.3.4

7、精密度考察精密吸取柚皮素对照品溶液5μl，按“2.3.1”项下色谱条件测定其峰面积，连续操作7次。测定结果为=4.685μg，RSD=0.61%(n=7)。说明仪器精密度良好。　　2.3.5稳定性考察精密吸取降香供试品溶液5μl，在0，1，3，6，12h，按“2.3.1”项下色谱条件测定柚皮素和异甘草素的峰面积，分别以柚皮素和异甘草素工作曲线计算。柚皮素的测定结果为=4.668μg，RSD=0.47%(n=5)，提示样品中柚皮素含量在12h内稳定。异甘草素测定结果为=7.092μg，RSD=1.01%(

8、n=5)，提示样品中异甘草素含量在12h内稳定。结果见表4。表4柚皮素和异甘草素稳定性考察（略）　　2.3.6重复性考察取同一号样品5份，按供试品溶液制备方法平行处理，依法测定，求得RSD为1.43%。说明该方法重复性良好。　　2.3.7各样品的含量测定精密吸取样品溶液10μl，按“2.3.1”项下色谱条件测定柚皮素的峰面积，以柚皮素的工作曲线计算各样品中的柚皮素含量，同样测定异甘草素的峰面积，以异甘草素的工作曲线计算各样品中的异甘草素含量