sv40大t抗原在人脑肿瘤中的表达

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1、SV40大T抗原在人脑肿瘤中的表达【关键词】SV40　　关键词:SV40;大T抗原（Tag）;脑肿瘤;p53;pRb　　摘要:目的探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原（Tag）的表达及与抑癌蛋白p53，pRb的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义.方法采用免疫共沉淀结合银染色及TostudytheexpressionofSV40earlyre-giongenecodingproduct，thelargetumorantigen（Tag），anditsinteractionorsuppressorsp53andpRbinhuman

2、braintumorigenesis.METHODSTagmunoprecipitationfolloanbraintumorsand8casesofnormalbraintissues.Tag-p53andTag-pRbplexesmunoprecipitationandortissuesrespectively.RESULTSSV40TaganbraintumorsalbraintissuesTag（P<0.05）.Tag-p53plexors，andTag-pRb-plexors.CON┐CLUSIONSV40Tage

3、xpressionisassociatedanbraintumorigenesis.Theinactivationofp53andpRbduetotheformationofTag-p53andTag-pRbplexesmightpos-siblybeanimportantmechanisminthepathogenesisofhu-manbraintumors.　　0引言　　近年有关猴病毒40（simianvirus40，SV40）与人脑肿瘤及其他某些类型肿瘤发生的病因学关系，已成为肿瘤学研究的一个新热点.但对于SV40是否存在

4、于人脑肿瘤组织中，以及是否表达癌蛋白大T抗原（Tag）仍无统一认识.已知人体细胞是SV40的半允许细胞，即使SV40确实存在于人脑肿瘤组织中，是否具有致瘤性，以及机制如何，对此国内外均未见报道［1，2］.我们采用免疫共沉淀结合银染色及Western印迹法，检测了SV40早期区域基因编码产物Tag在人脑肿瘤中的表达，并发现Tag可与抑癌蛋白p53及pRb形成特异性复合物，进一步讨论了SV40与人脑肿瘤发生的病因学关系.　　1材料和方法　　1.1材料人脑肿瘤65例及正常人脑组织8例新鲜标本均由全军神经外科研究所标本库提供.脑肿瘤按19

5、90年WHO标准分类，包括胶质瘤45例，脑膜瘤和垂体腺瘤各10例.以表达SV40Tag的HFSV40细胞株作为阳性对照.　　1.2方法　　1.2.1免疫共沉淀［3］组织标本或培养细胞经裂解处理后，分别用SV40Tag单抗、p53单抗或pRb多抗及A蛋白-sepharose珠沉淀目的蛋白.阴性对照用无关肝癌小鼠腹水代替上述抗体.　　1.2.2银染色［3］蛋白样品经100gL-1SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后，凝胶用新配制的1gL-1硝酸银溶液染色.　　1.2.3Western印迹　［3］蛋白样品经100gL　-1SDS-聚丙烯酰胺凝胶

6、电泳后，电转移至硝酸纤维素膜.分别用Tag单抗（15000）或pRb多抗（11000）或同时加入Tag单抗（15000）及p53单抗（11000）作为第一抗体，用硫酸镍铵加强法DAB显色.　　统计学分析:应用美国SPSS7.5统计软件包，采用χ2检验.　　2结果　　2.1SV40Tag在人脑肿瘤中普遍表达银染色及Western印迹结果一致，其中胶质瘤阳性率为60%（27/45），脑膜瘤70%（7/10），垂体腺瘤90%（9/10），而8例正常人脑组织均无Tag表达;脑肿瘤SV40Tag总阳性率66%（43/65），与正常脑组织比较

7、差异显著（P<0.05，Fig1，2）.　　图1－图2略　　2.218例Tag阳性瘤组织包括胶质瘤12例，垂体腺瘤及脑膜瘤各3例，免疫共沉淀结合Western印迹均显示Tag及p53蛋白带共同存在，表明Tag与p53可形成特异性复合物（Fig3）.　　3讨论　　SV40是一种DNA肿瘤病毒，在体外可使人及动物多种组织类型正常细胞发生恶性转化，在啮齿类动物及转基因小鼠体内可诱发多种肿瘤形成［4］，但与人肿瘤发生的病因学关系始终未能明确［1，2］.近年国外学者采用PCR结合Southern印迹杂交发现，在人脑肿瘤组织中存在SV4

8、0基因组结构，RT-PCR及免疫组化证实Tag在转录和翻译水平均有表达［5-8］，提示SV40与人脑肿瘤的发生有一定关系.由于以往未见有在人肿瘤组织中单纯用r（9～10）×104之间存在一条显见的蛋白带，提示Tag（Mr9.4×104）的存在.进一