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时间:2018-10-28
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1、SV40大T抗原在人脑肿瘤中的表达【关键词】SV40 关键词:SV40;大T抗原(Tag);脑肿瘤;p53;pRb 摘要:目的探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原(Tag)的表达及与抑癌蛋白p53,pRb的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义.方法采用免疫共沉淀结合银染色及TostudytheexpressionofSV40earlyre-giongenecodingproduct,thelargetumorantigen(Tag),anditsinteractionorsuppressorsp53andpRbinhuman
2、braintumorigenesis.METHODSTagmunoprecipitationfolloanbraintumorsand8casesofnormalbraintissues.Tag-p53andTag-pRbplexesmunoprecipitationandortissuesrespectively.RESULTSSV40TaganbraintumorsalbraintissuesTag(P<0.05).Tag-p53plexors,andTag-pRb-plexors.CON┐CLUSIONSV40Tage
3、xpressionisassociatedanbraintumorigenesis.Theinactivationofp53andpRbduetotheformationofTag-p53andTag-pRbplexesmightpos-siblybeanimportantmechanisminthepathogenesisofhu-manbraintumors. 0引言 近年有关猴病毒40(simianvirus40,SV40)与人脑肿瘤及其他某些类型肿瘤发生的病因学关系,已成为肿瘤学研究的一个新热点.但对于SV40是否存在
4、于人脑肿瘤组织中,以及是否表达癌蛋白大T抗原(Tag)仍无统一认识.已知人体细胞是SV40的半允许细胞,即使SV40确实存在于人脑肿瘤组织中,是否具有致瘤性,以及机制如何,对此国内外均未见报道[1,2].我们采用免疫共沉淀结合银染色及Western印迹法,检测了SV40早期区域基因编码产物Tag在人脑肿瘤中的表达,并发现Tag可与抑癌蛋白p53及pRb形成特异性复合物,进一步讨论了SV40与人脑肿瘤发生的病因学关系. 1材料和方法 1.1材料人脑肿瘤65例及正常人脑组织8例新鲜标本均由全军神经外科研究所标本库提供.脑肿瘤按19
5、90年WHO标准分类,包括胶质瘤45例,脑膜瘤和垂体腺瘤各10例.以表达SV40Tag的HFSV40细胞株作为阳性对照. 1.2方法 1.2.1免疫共沉淀[3]组织标本或培养细胞经裂解处理后,分别用SV40Tag单抗、p53单抗或pRb多抗及A蛋白-sepharose珠沉淀目的蛋白.阴性对照用无关肝癌小鼠腹水代替上述抗体. 1.2.2银染色[3]蛋白样品经100gL-1SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,凝胶用新配制的1gL-1硝酸银溶液染色. 1.2.3Western印迹 [3]蛋白样品经100gL -1SDS-聚丙烯酰胺凝胶
6、电泳后,电转移至硝酸纤维素膜.分别用Tag单抗(15000)或pRb多抗(11000)或同时加入Tag单抗(15000)及p53单抗(11000)作为第一抗体,用硫酸镍铵加强法DAB显色. 统计学分析:应用美国SPSS7.5统计软件包,采用χ2检验. 2结果 2.1SV40Tag在人脑肿瘤中普遍表达银染色及Western印迹结果一致,其中胶质瘤阳性率为60%(27/45),脑膜瘤70%(7/10),垂体腺瘤90%(9/10),而8例正常人脑组织均无Tag表达;脑肿瘤SV40Tag总阳性率66%(43/65),与正常脑组织比较
7、差异显著(P<0.05,Fig1,2). 图1-图2略 2.218例Tag阳性瘤组织包括胶质瘤12例,垂体腺瘤及脑膜瘤各3例,免疫共沉淀结合Western印迹均显示Tag及p53蛋白带共同存在,表明Tag与p53可形成特异性复合物(Fig3). 3讨论 SV40是一种DNA肿瘤病毒,在体外可使人及动物多种组织类型正常细胞发生恶性转化,在啮齿类动物及转基因小鼠体内可诱发多种肿瘤形成[4],但与人肿瘤发生的病因学关系始终未能明确[1,2].近年国外学者采用PCR结合Southern印迹杂交发现,在人脑肿瘤组织中存在SV4
8、0基因组结构,RT-PCR及免疫组化证实Tag在转录和翻译水平均有表达[5-8],提示SV40与人脑肿瘤的发生有一定关系.由于以往未见有在人肿瘤组织中单纯用r(9~10)×104之间存在一条显见的蛋白带,提示Tag(Mr9.4×104)的存在.进一
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