hplc法测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸的含量

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1、HPLC法测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸的含量【摘要】目的建立测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸含量的方法。方法采用高效液相色谱法，用依利特BDSC18色谱柱（200mm×5.0mm，5μm），以甲醇0.013mol/L磷酸盐缓冲液（体积比23∶77）为流动相；流速为1.0mL/min，检测波长为320nm。结果在0.0425～0.425μg范围内，峰面积与进样量线性关系良好（r＝0.9999），加样平均回收率为99.05%，RSD为2.9%。结论该法简便、可靠、准确，结果满意。【关键词】HPLC;清咽宁喷雾剂；咖啡酸；含量测定　　DeterminationofcaffeicacidinQingy

2、anningspraybyHPLC　　Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminationofcaffeicacidinQingyanningspray.MethodsThesamplen(200mm×5.0mm,5μm)usingmethanol0.013mol/Lphosphatesaltsolution(23∶77)asthemobilephase.ThefloL/minandthedetection.ResultsThemethodexhibitedgoodlinearityfrom0.0425to0.425μg

3、(r=0.9999).Theaveragerecoveryethodisconvenient,reliableandaccurateforthequalitycontrolofthespray.　　Keym×200　mm，5μm）；流动相：甲醇磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠1.56g，加水使溶解成1000mL，再加1%磷酸溶液调节pH值至3.8～4.0）（体积比23∶77），流速：1.0mL/min；理论板数以咖啡酸峰计算，不得低于3000。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备　　精密称取在110℃干燥至恒重的咖啡酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含咖啡酸30μg的溶液，即

4、得。　　2.2.2供试品溶液的制备　　精密量取本品2mL，加醋酸乙酯振摇提取3次，每次10mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇适量，使溶解，移入50mL量瓶中，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得。　　2.3测定波长的确定　　取对照品（0.030mg/mL）溶液，在500～200nm波长范围内进行扫描，结果在320nm波长处有最大吸收，见图１，故确定检测波长为320nm。　　２.４色谱条件的确定　　在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪测定。结果咖啡酸在15min内出峰，而且与前后的峰均有较好的分离，理论板数在3　000以上。见图2，图3。　　图1紫

5、外光谱图　略　　按本品制剂中工艺方法制得去蒲公英和忍冬藤的空白制剂，与供试品溶液色谱和咖啡酸对照品溶液色谱比较，结果阴性样品中未见咖啡酸色谱峰，见图4。　　图2－图4　略　　　2.５线性关系考察　　　精密称取在110℃干燥至恒重的咖啡酸对照品17.0mg,置100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mL分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别注入液相色谱仪5μL，测定峰面积。以进样量（m）为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归分析，得回归方程Ａ=１０３６８m-６１３４８

6、，r=0.9999。结果表明：咖啡酸在0.0425～0.425μg范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。　　2.６精密度试验　　精密吸取上述线性关系考察中第3号对照品溶液，按上述液相色谱条件，进样测定５次，结果峰面积的ＲＳＤ值为1.2℅，表明方法精密度良好。　　2.７重复性试验　　　取本品(批号040628)5份，按“2.2.2”项方法制备，进样测定，结果咖啡酸平均质量比为0.500mg/g，其ＲＳＤ值为1.97%，表明方法重复性好。　　2.８加样回收率试验　　取本品(批号040628)6份，精密加入咖啡酸对照品溶液(0.3mg/mL)，按“2.2.2”项方法制备，进样测定，结果见表

7、１。　　表1咖啡酸回收率试验结果(略)　　2.９稳定性试验　　取本品（批号040628）,按“2.2.2”项方法制备，分别于0、1、2、4、8、24h进行测定峰面积，结果ＲＳＤ值为1.3％，表明本品供试品溶液在0～24h内基本稳定。　　2.10样品测定　　取本品3批，照“供试品溶液”和“对照品溶液”方法制备，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5μL，按上述色谱条件进行测定，按外标法计算。结果见表２。　　表2咖啡酸含量测定结果　略　　3讨论　　3.1咖啡酸作