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1、HPLC法测定银蒲解毒片中咖啡酸的含量论文.freelm×250mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液(26∶74)为流动相,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为323nm。结果咖啡酸进样量在0.778～2.72μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r＝0.9999),平均回收率为98.80%,RSD＝0.56%。结论此法操作简单,结果准确,.freelethodfordeterminationofcaffeicacidinYinpujieduTabletsbyHPLC.MethodsStationaryphasem×250mm,5μm),mobilephase
2、ethanol-0.1%phosphoric(26∶74),detection,floL/minandcolumntemperatureethodissimpleandconvenientfortheoperation.ItisveryaccurateandsuitableforthequalitycontrolofYinpujieduTablets.Keyination银蒲解毒片是由山银花、蒲公英、紫花地丁、夏枯草、野菊花加辅料蔗糖、滑石粉、硬脂酸镁制成的糖衣片,具有清热解毒的功效,用于治疗急性咽炎等。现有关文献资料中尚未有该制剂中咖啡酸含量的测定。为更好地控制该制剂的
3、质量,本试验采用高效液相色谱(HPLC)法对咖啡酸进行含量测定。1仪器与试药Agilent1100系列高效液相色谱仪：G1311A四元泵,G1313A自动进样器,G1379A脱气机,G1314Vm×250mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(26∶74),流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为323nm,进样量为10μL。2.2对照品溶液的制备精密称取于110℃干燥至恒重的咖啡酸15.55mg,置20mL棕色量瓶中,加甲醇溶解并定容,制成质量浓度为0.7775mg/mL的对照品溶液作为储备液,备用。2.3供试品溶液的制备取银蒲解毒片(批号390002)适
4、量,研细,混匀,取约1.0g,精密称定,置50mL锥形瓶中,量取甲醇溶液20mL置锥形瓶中,回流30min,滤过,蒸干,残渣用水10mL溶解,过滤,滤液置分液漏斗中,用乙酸乙酯提取2次,每次10mL,滤液蒸干,残渣用甲醇定容至2mL的容量瓶中,用0.45μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。2.4阴性对照溶液的制备按处方量称取除蒲公英、夏枯草外的其他药材,照供试品溶液项下操作,制成阴性对照品溶液。2.5方法学考察2.5.1干扰试验在上述色谱条件下,取对照品、供试品和阴性对照品溶液各10μL,进样测定。结果在对照品色谱峰保留时间相应的位置上,阴性对照品溶液无吸收,对样品的测定无
5、干扰,且样品中咖啡酸的理论塔板数不低于3500,分离良好。色谱图见图1。2.5.2标准曲线绘制准确吸取咖啡酸对照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL,分别置10mL棕色量瓶中,加甲醇溶液稀释至刻度,摇匀后分别取10μL进样分析。以咖啡酸峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线,得回归方程：Y＝2928.35X－17.21,r＝0.9999,结果表明,咖啡酸进样量在0.778～2.72μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.5.3精密度试验取咖啡酸对照品溶液10μL,在上述色谱条件下重复进样6次。以咖啡酸峰面积计算得RSD＝0.70%。2.5.4重复
6、性试验取银蒲解毒片(批号390002)1.0g,共5份,精密称定,制备供试品溶液,在上述色谱条件下进样测定。以咖啡酸的质量分数计算得RSD＝0.81%。2.5.5稳定性试验取同一供试品溶液10μL,按0、6、l2、l8、24h间隔进样。测得咖啡酸的峰面积RSD＝1.35%,表明供试品溶液在24h内基本稳定。2.5.6加样回收率试验取银蒲解毒片(批号390002)样品6份,每份约0.5g,精密称定,置10mL锥形瓶中,精密加入咖啡酸对照品适量,各2份,按供试品溶液制备项下制备,在上述色谱条件下进样测定,计算回收率。结果见表1。表1加样回收率试验结果（略）2.6样品含量测定取
7、3个不同批号的银蒲解毒片,依法制备供试品溶液,在上述色谱条件下进样测定,结果见表2。表2样品中咖啡酸含量测定结果（略）3讨论根据咖啡酸紫外吸收光谱图并参考2005年版《中华人民共和国药典》(一部)蒲公英项1,选用323nm为检测波长。根据2005年版《中华人民共和国药典》(一部)蒲公英项下含量测定条件及有关文献报道进行试验,结果甲醇-磷酸盐缓冲液(25∶75)为流动相1和甲醇-1%磷酸(26∶74)为流动相2,两种方法样品中咖啡酸峰形均较好,与其他组分均可达到基线分离,且空白对照无干扰。但考虑到对柱子的保护和方法的简便问题,故
