erk1-2信号通路在egcg抑制mgc

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1、Erk1/2信号通路在EGCG抑制MGC【关键词】EGCG；胃肿瘤；c-Myc；Erk1/2【Abstract】ObjectiveToprobetheeffectsofgreenteaextractepigallocatechin-3-gallate(EGCG)onproliferationofhumangastriccancercelllineMGC-803anditsmolecularmechanisms.MethodsMTTassaymunocytochemistry.Theexpress

2、ionofphosphoratedErk1/2proteininMGC-803cellsinedusingTTassayhasshoanner.ImmunocytochemistrydetectedtheexpressiondoedtheexpressionofphosphorylatedErk1/2proteinsignificantlydoanneranditsmechanismassociated；c-Myc；Erk1/2　　Erk1/2信号通路在EGCG抑制MGC【关键词】EGCG；胃肿

3、瘤；c-Myc；Erk1/2【Abstract】ObjectiveToprobetheeffectsofgreenteaextractepigallocatechin-3-gallate(EGCG)onproliferationofhumangastriccancercelllineMGC-803anditsmolecularmechanisms.MethodsMTTassaymunocytochemistry.TheexpressionofphosphoratedErk1/2proteinin

4、MGC-803cellsinedusingTTassayhasshoanner.ImmunocytochemistrydetectedtheexpressiondoedtheexpressionofphosphorylatedErk1/2proteinsignificantlydoanneranditsmechanismassociated；c-Myc；Erk1/2近年来，研究开发天然植物药抗肿瘤已成为有前景的新领域，并取得了可喜成绩，如：羟基喜树碱、三尖杉酯碱等对肿瘤细胞有明显抑制作用，并已研

5、制出用于临床的制剂［1，2］。茶是一种由山茶科植物的叶片经一定的工艺制作成的饮料。研究发现绿茶及其提取物具有清除氧自由基、抗氧化、抗突变、抗炎抗病毒和抑制肿瘤生长等众多功效［3～5］。流行病学调查表明常饮绿茶与肿瘤的低发生率有关［6］。表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）是绿茶的主要成分之一。本试验观察EGCG对人低分化胃腺癌MGC-803细胞株生长的影响，初步探讨EGCG抑制胃癌细胞增殖的分子机制。1材料与方法1.1药品试剂EGCG（Sig

6、ma公司产品，纯度95%）购自北京鼎国生物技术有限责任公司，EGCG用磷酸盐缓冲液溶解，配成5mg/ml，0.22μm微孔滤膜抽滤除菌，4℃保存；培养基RPMI－1640（Gibco公司产品）；小牛血清（杭州四季青生物工程公司产品）；c-Myc抗体、S-P试剂盒、DAB试剂盒均购自福州迈新公司（美国MAXIN公司产品）；Erk1/2抗体、磷酸化Erk1/2抗体购自基因公司（SantaCruz公司产品）。1.2细胞培养人胃癌MGC-803细胞株，由中南大学湘雅医学院肿瘤所引进，系山东师范大学培育的

7、人胃低分化黏液腺癌。本所保种、传代，培养基为RPMI－1640，抽滤除菌，临用前加10％小牛血清，细胞培养于37℃、5％体积分数CO2培养箱中。1.3MTT法测定细胞增殖抑制作用取对数增长期细胞，消化后调整细胞密度至3×104/ml，96孔板每孔种细胞悬液180μl，6h后加不同浓度EGCG（20μl），试验设5个不同浓度组（终浓度为100μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、40μg/ml、20μg/ml），调零组和空白对照组加等体积PBS，加药后继续培养48h，每孔加MTT（5mg/m

8、l）20μl，调零组不加MTT。共同孵育4h后，吸尽培养板内液体，每孔加DMSO150μl，震摇10min，置酶联免疫检测仪测定A570值。1.4免疫细胞化学取对数生长期细胞常规消化后接种于含灭菌盖玻片的六孔板中，培养6h后加入处理因素（EGCG终浓度60μg/ml），培养48h，取出贴附细胞的盖玻片，按照S-P试剂盒说明操作。依次进行固定，过氧化物酶阻断，非免疫动物血清封闭，孵育一抗，孵育二抗，DAB显色，苏木素衬染，酒精梯度脱水，中性树胶封片。1.5免疫印迹细胞培养后用悬浮裂解液于冰上裂解细