黄芪激活erk1-2信号转导通路抗心肌细胞再灌注损伤作用

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1、黄芪激活ERK1/2信号转导通路抗心肌细胞再灌注损伤作用宋光，何蕾,王彬,江朝光【摘要】目的研究黄芪注射液调节ERK1/2信号转导通路抗培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤的作用。方法采用培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型，实验分为五组：A组为正常对照组，B、C、D、E组均为缺氧／复氧组，其中各组培养液组成为：B组缺氧液，C组缺氧液加黄芪，D组缺氧液加PD98059，E组缺氧液加黄芪和PD98059。缺氧4h，复氧2h。比较缺氧/复氧前后培养液中心肌酶含量，并进行心肌细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达检测。结果缺氧/复氧后对各组细胞培养液中心

2、肌酶含量进行比较，结果显示各缺氧组与正常对照组比较，心肌谷草转氨酶(GOT)，乳酸脱氢酶(LDH)，肌酸激酶(CK)均有升高（P＜0.05）。黄芪缺氧组与缺氧对照组比较，GOT升高减轻（P＜0.05）。ERK抑制剂PD98059对黄芪的保护作用有一定削弱，但没有统计学意义。黄芪可使缺氧/复氧引起的心肌细胞ERK表达增加，PD98059对黄芪引起的ERK表达增加没有明显抑制作用。结论黄芪能够减轻缺血再灌注损伤，其机制涉及了ERK1/2信号途径。【关键词】信号转导；再灌注损伤；心肌保护；细胞低氧Abstract:OBJECTIVEToev

3、aluatetheprotectiveeffectofastragalusinjectionthroughactivationofERK1/2pathyocytes.METHODSStudiesyocytesia/reoxygenation,myocardialenzymeinedandERK1/2expressioninutesofreperfusion.RESULTSIncardiacmyocytes,incubationia/reoxygenationattenuatedtheextentofcelldamage.Protect

4、iveeffectofastragalusinjectionia/reoxygenationmyocytes.CONCLUSIONThisstudiyshoyocytesinjuryduringreperfusionandthemechanisminvolvesERK1/2activation.Keyitogen-activatedproteinkinase,MAPK)在体内体外的心肌组织缺血再灌注损伤实验中都能激活。本文旨在研究黄芪抗再灌注损伤作用与MAPK家族中心肌细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-reg

5、ulatedkinase,ERK)1/2信号通路活化的关系，探讨黄芪的心肌保护作用机制。1材料和方法1.1原代心肌细胞培养取材自同窝出生1～3日龄SpragueDaM,KCl12mM,MgCl20.49mM,CaCl20.9mM,HEPES4mM,deoxyglucose10mM,sodiumlactate20mM,pH6.2）［2］为高钾低pH溶液，用以模拟心脏细胞暴露于无氧条件。其后将细胞置于配气（95%N2+5%CO2，北京普莱特斯公司）饱和的容器中，放入孵箱，37℃培养4h。4h后恢复有氧环境，倾去缺氧缓冲液，换正常10％血清

6、极限必需培养基(DMEM)后将细胞置于5%CO2孵箱中，于复氧条件下继续培养2h，造成心肌细胞缺氧复氧损伤。1.3实验分组及实验方法培养的乳鼠心肌细胞随机分为5组。A组正常对照组，不加入黄芪，也不进行缺氧复氧处理。B组，C组，D组，E组均为缺氧／复氧组，其中各组培养液组成为：B组缺氧液，C组缺氧液加黄芪，D组缺氧液加ERK抑制剂PD98059（Promega公司，美国），E组缺氧液加黄芪和PD98059，黄芪终浓度为200μl黄芪/ml培养液，PD98059终浓度5μΜ［2］。实验开始时A实验组更换10%胎牛血清DMEM培养液入培养箱

7、培养6h。缺氧／复氧各组更换相应缺氧培养液，缺氧培养4h，随后更换相应复氧培养液培养2h。实验结束时取各组培养液0.5ml在全自动生化分析仪上测定心肌酶含量，并将各组细胞提取蛋白进行检测。1.4处的吸光度值，进行蛋白质定量。随后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，积层胶浓度5%，分离胶浓度10%，电泳在Tris-甘氨酸缓冲液中进行，所用电压为：积层胶120V，分离胶140V。电泳结束后硝酸纤维素膜电转移2h，电流0.65mA/cm2。转膜完成后10％的脱脂奶粉37℃封闭硝酸纤维素膜1h，加入1∶300小鼠抗ERK抗体（SantaCruz，美国）孵

8、育，4℃过夜。磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗后加入1∶1000HRP标记羊抗小鼠二抗（中杉金桥生物技术公司，北京），37℃孵育1h。PBS漂洗后发光试剂显色，曝光，冲洗，扫描成像。图像经凝胶图像分析系统分析。1.5统计方法采