兔脂肪间充质干细胞与纳米组织工程骨治疗兔perthes病实验研究

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1、兔脂肪间充质干细胞与纳米组织工程骨治疗兔perthes病实验研宄甄允方王晓东张亚刘屮书（苏州大学附属儿童医院骨科江苏苏州215003）【摘要】A的研宄应用兔脂肪间充质干细胞结合纳米组织工程骨治疗兔早期perthes病的效果。方法制备兔perthes病模型，应用兔脂肪间充质干细胞结合纳米组织工程骨进行早期治疗，观察股骨头修复情况。结果应用脂肪间充质结合纳米骨治疗组，股骨失修复效果明显。结论兔脂肪间充质干细胞结合纳米组织工程骨治疗兔早期perthes病，能促进兔股骨头坏死的修复。【关键词】兔脂肪间充质干细胞纳米组织工程骨【中图分类号】R68【文献标识码】A【文章编号】

2、2095-1752（2012）34-0115-02目前perthes病的治疗主要为保守治疗和手术治疗，但无论是哪种治疗方式，治疗的目的在于尽可能的防止股骨头变形，维持髋关节稳定性及正常的对位关系。随着对perthes病发生机理及疾病转归的认识，很多学者认为及早的对perthes病进行手术干预，以期尽快恢复血供，修复坏死，缩短病程。本实验研究的目的在于探索兔脂肪间充质干细胞复合纳米组织工程骨对兔早期perthes病的治疗作用。1.材料和方法1.1仪器与试剂西门子MRI（MAGNETOMC10.35T）,菲利普500mAX线机，倒置显微镜（重庆光电总公司），CO2培养

3、箱（美国SHELLAB）,温控离心机（德国，HERAUS）,RPMI1640（美国,Gibco）胎牛血清（杭州四季青生物工程有限公司），谷氨酰胺（美国，Sigma）,胰蛋白酶（美国，Sigma）,Hepes（美国，Sigma）,BrdU（美国，Sigma）,血管内皮细胞VD1因子鼠抗兔单克隆抗体（ADL公司）。1.2支架材料纳米相羟基磷灰石/胶原骨（NHAC）。将圆柱形材料制备成5×5×5mm大小。Co-60放射消毒备用。1.3ADMSCs培养及细胞与支架复合（详见第三部分）1.4兔perthes病模型制作取2kg（三月龄）左右新西兰大白兔

4、45只，随机分为三组：A组15只（单纯制模组），B组15只（制模后两周植入纳米骨组），C组15只（制模两周后植入细胞复合纳米骨组），将兔用戊巴比妥钠30mg/kg耳缘静脉注射麻醉后，左髋部剃毛并清洁皮肤，腆洒洒精消毒皮肤，铺洞巾，严格按照无菌原则进行手术。取髋关节后外侧切口，长约6cm,切开皮肤后沿股骨人粗隆肌间隙进入，到达关节囊后切开，切断圆韧带将股骨头脱位，切断支持带血供，并向下剥除支持带直达粗隆间线水平,将髋关节复位，逐层缝合，术后肌注青霉素80万u×3天，备用。1.5手术修复兔perthes病制模两周后，A组不做任何处理。B、C组将兔麻醉后，循

5、原手术切U暴露出股骨头。在X线透视下在股骨头外下方做一3mm×3mm窗口，用自制刮匙沿开窗处进入，将股骨头内坏死骨刮除，尽量避免损伤骺板。刮除坏死骨后B组植入纳米骨，C组植入兔脂肪间充质干细胞及新型纳米材料的复合物。1.观察及相关检测指标三组在治疗后2、4、6周（即分别相当于制模后4、6、8周）进行观察检测。2.1大体观察观察术后动物生活情况，局部的伤U愈合情况，处死动物后与自身正常股骨头相比较肉眼观察股骨头情况。2.2实验组X线检査情况三组在制模后4、6、8周各处死5只动物行X线检查观察股骨头情况。2.3实验组MRI检查三组在制模后4、6、8周各处死

6、5只动物行MRI检查观察股骨头情况。2.4组织形态学检查三组在制模后4、6、8周各处死5只动物，取标本后10%中性福尔马林溶液固定，脱钙一周，石蜡包埋切片，HE染色，封片后镜下观察。2.5标本组织FVlll-Ag免疫组化染色。1.统计学方法所得数据用SPASS10.0统计软件进行统计学分析。数据以均数&plUSmn;标准差（x-±SD）表示，实验组与对照组之间比较采用t检验，p值＜0.05为有统计学意义。2.结果4.1大体观察三组术后活动情况良好。45只兔子在麻醉过程中死亡两只（补做两只）其余都达到指定观察吋间。A组：四周后股骨头表面失去光泽，软骨部

7、分失去半透明性状，稍显苍白。六周后苍白明显，尤以圆韧带附近明显，有一例标本呈现灰黄色。术后八周股骨头表面不光滑，软骨组织出现片状隆起及缺损，股骨头较正常稍小（图1）。B组：术后四周股骨头表面软骨光泽稍差，六周吋表现出软骨下苍白，股骨头圆形，八周时股骨头表面不光滑，软骨下苍白部略显红色，软骨组织出现轻度缺损（图2）。C组：四周股骨头表面软骨光泽稍差，可见软骨下苍白变化。六周股骨头仍见苍白变化，但部分恢复红色，表面软骨无塌陷情况，八周吋股骨头表面较正常略不光滑，股骨头软骨下骨恢复红色，未发现股骨头变小情况（图3）。4.2X线检查情况A组：四周后股骨头密度增高不明显，骨

8、骺高度未见