酿酒酵母ars304及其侧翼序列重组质粒构建及鉴定

《酿酒酵母ars304及其侧翼序列重组质粒构建及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、酿酒酵母ARS304及其侧翼序列重组质粒构建及鉴定摘要：采用PCR扩增酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)III号染色体ARS304序歹1J(S1)及以ARS304为核心上下游延伸1kb的侧翼序列(S2)，并将目的片段分别构建到酵母整合载体PRS405中，获得重组质粒pRSl和pRS2。质粒电转化试验发现重组质粒pRS2的转化率大于pRSl，说明ARS304侧翼序列能显著提高ARS304在酿酒酵母中自主复制的能力。关键词：酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae);自主

2、复制序列(ARS)；重组质粒；复制起始活性中图分类号：Q785文献标识码：A文章编号：0439-8114(2012)21-4891-03ConstructionandIdentificationofRecombinantPlasmidsofSaccharomycescerevisiaeARS304andItsFlankSequenceLIJun,WANGXin，ZHANGQi-sheng，CAILu(InstituteofBioengineeringandTechnology,InnerMongliaUni

3、versityofScienceandTechnology,Baotou014010，InnerMonglia,China)Abstract：ARS304gene(SI)anditsflanksequence酿酒酵母ARS304及其侧翼序列重组质粒构建及鉴定摘要：采用PCR扩增酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)III号染色体ARS304序歹1J(S1)及以ARS304为核心上下游延伸1kb的侧翼序列(S2)，并将目的片段分别构建到酵母整合载体PRS405中，获得重组质粒pRSl和pR

4、S2。质粒电转化试验发现重组质粒pRS2的转化率大于pRSl，说明ARS304侧翼序列能显著提高ARS304在酿酒酵母中自主复制的能力。关键词：酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae);自主复制序列(ARS)；重组质粒；复制起始活性中图分类号：Q785文献标识码：A文章编号：0439-8114(2012)21-4891-03ConstructionandIdentificationofRecombinantPlasmidsofSaccharomycescerevisiaeARS304and

5、ItsFlankSequenceLIJun,WANGXin，ZHANGQi-sheng，CAILu(InstituteofBioengineeringandTechnology,InnerMongliaUniversityofScienceandTechnology,Baotou014010，InnerMonglia,China)Abstract：ARS304gene(SI)anditsflanksequence(S2)ofSaccharomycescerevisiaewereclonedbyPCR,and

6、thenconnectedintotheshuttlevectorpRS405.RecombinantplasmidspRSlandpRS2weresuccessfullyconstructedandusedforelectroporationofS.cerevisiae.ResultsshowedthattheelectricitytransformationrateofpRS2washigherthanthatofpRSl，indicatingthatflanksequencecouldimprovet

7、heautonomouslyreplicatingactivityofARS304inS.cerevisiae.Keywords:Saccharomycescerevisiaeautonomouslyreplicatingsequence(ARS)；recombinantplasmids；replicationoriginsactivity复制起始的调控涉及细胞周期的调控、基因扩增、肿瘤发生等重大生物学问题，是真核生物基因表迖调控的重要内容。酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中复制起

8、始依赖的顺式作用元件被称为自主复制序列(Autonomouslyreplicatingsequence,ARS),典型的ARS有一段11bp富含A/T的保守序列［5’-(A/T)TTTA(T/C)(A/G)TTT(A/T)-3’］，称为ACS(ARSconsensussequence),这些位点发生突变时会导致ARS失去活性，进而影响到复制起始的功能。在酿酒酵母III号染色体上已发现有19个ARS元件，但却存在超