青蒿琥酯对胃癌细胞系hgc27细胞增殖、凋亡影响和其机制

《青蒿琥酯对胃癌细胞系hgc27细胞增殖、凋亡影响和其机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、青蒿琥酯对胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡影响和其机制［摘要］目的探讨青蒿琥酯对大胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法体外培养HGC27细胞，采用不同浓度青蒿琥酯处理24、48、72h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响；倒置显微镜下观察细胞的形态学变化；青蒿琥酯(浓度分别为20、40、80mg/L)处理HGC27细胞48h后，分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3、Caspase-9相对活性、Westernblot法检RUNX-3蛋白表迗情况。结果青蒿琥酯(浓度10〜100mg/L)

2、能抑制HGC27细胞的增殖，呈剂量和时间依赖性；倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态。青蒿琥酯(浓度分别为20、40、80mg/L)作用HGC27细胞48h后，细胞凋亡率分别为11.5%,21.4%.36.6%，而对照组凋亡率仅为2.2。/0;处理后Casepase-3相对活性分别为(0.19±0.02)、(0.25±0.04)和(0.31±0.03)，对照组为(0.11±0.02)，Casepase-9相对活性分别为(0.18±0.02)、(0.23±0.03)和(0.30±0.04)，对照组为(0.10±0.02)，与对照组比较，青

3、蒿琥醋处理组Casepase-3.Caspase-9相对活性显著增加，差异均有统计学意义(均P[Keywords]Artesunate；HGC27cell；Caspase-3；Caspase-9；RUNX-3胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，胃癌死亡率居肿瘤相关死亡率前列［1］。我国胃癌的发病率呈逐年上升趋势，严重威胁着人民群众的生命健康。胃癌治疗方法以手术切除为主，辅以化疗，但常规的化疗药物毒性大且常出现耐药性，因此寻找有效且毒副作用小的抗肿瘤药已经成为国内外研究热点。青蒿素及其衍生物是我国自主知识产权的高效速效抗癌药物。近年来研究发现，青蒿

4、素及其衍生物除了有抗疮作用外，还对人类多种肿瘤细胞具有明显的杀伤或抑制作用［2-4］，但具体机制尚不十分清楚。为探讨青蒿素衍生物之一青蒿琥酯的抗癌机制，本研究以人胃癌HGC27细胞为对象，观察青蒿琥酯对人胃癌细胞增殖、凋亡的影响，并检测青蒿琥醋对人胃癌细胞Caspase-3、Caspase-9活性变化及抑癌基因人类相关转录因子3(humanrunt-relatedtranscriptionfactor3,RUNX3)表达的影响。1材料与方法1.1材料人胃癌细胞HGC27细胞购自中国科学院上海细胞库；青蒿琥酪购于桂林南药股份有限公司；Ann

5、exinV/PI试剂盒购于BENDER公司；胎牛血清购自Invitrogen公司；RPMI1640培养液购于杭州四季青生物材料研究所；胎牛血清系GIB⑶产品；MTT试剂盒购于武汉谷歌生物科技有限公司；Caspase-3、Ca.spase-9活性检测试剖盒购于南京凱基生物科技发展有限公司；RUNX-3单克隆抗体购自CellSignalingTechnology公司；辣根酶标记兔抗山羊IgG购自武汉博士德生物科技有限公司。1.2方法1.2.1细胞培养HGC27细胞培养于RPMI1640培养液中（含10%小牛血清，100U/mL青霉素，100u

6、g/mL链霉素），置于37°C，饱和湿度，5%C02培养箱内培养，根据生长情况3〜5d传代一次。1.2.2MTT法检测细胞增殖抑制率取对数生长期的HGC27细胞，制成细胞悬液，以lX104/mL的浓度接种于96孔板，每孔200uL，待细胞贴壁后分组：青蒿琥酯组加入青蒿琥酯终浓度为10、20、40、80、100mg/L的培养液，对照组加入等量的培养液，并设立调零孔。每组设5个复孔，分别培养24、48、7211，实验结束前411加入111!试剂20uL/每孔，继续孵育4h，小心吸掉上清，每孔加150uLDMSO,振荡lOmin，使结晶充分溶

7、解，酶标仪上检测每孔在570nm处的吸光值（A值）。抑制率=[].-（实验组平均A值-调零孔A值）/（对照组平均A值-调零孔A值）]X100%。1.2.3显微镜下观察细胞形态取对数生长期细胞消化传代并培养24h后，换青蒿琥酯终浓度为10、20、40、80、100mg/L的培养液连续培养24、48、72h后置于倒置显微镜下观察细胞生长情况。1.2.4流式细胞仪检测细胞凋亡取对数生长期细胞，以lX106/mL浓度接种于6孔培养板中，贴壁后分为实验组和对照组，实验组分别加入青蒿琥酯终浓度为20,40,80mg/L的培养液，对照组加入等量培养液，

8、培养48h后，收集细胞，离洗固定后加入AnnexinV-FITC和PI染色。筛网过滤送流式细胞仪检测细胞凋亡率。1.2.5分光光度法检测Caspase—3、Caspase-9活性变化细胞接种及