塞来昔布对鼻咽癌e2细胞增殖抑制的实验

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1、塞来昔布对鼻咽癌E2细胞增殖抑制的实验【】目的研究环氧化酶2抑制剂塞来昔布对鼻咽癌细胞e2增殖的影响。方法采用mtt法测定细胞代谢率，以流式细胞术观察细胞dna含量和凋亡的变化情况，免疫组化sp法检测cox2的表达情况。结果塞来昔布对e2细胞有明显的增殖抑制作用，呈时间和剂量依赖性。细胞周期各时相dna含量改变明显，g0～g1期细胞显著升高(由最初47.03%升至最高79.20%)，而s、g2～m期细胞明显下降；凋亡率显著增高。塞来昔布明显下调细胞中cox2蛋白的表达。结论塞来昔布对鼻咽癌e2细胞有明显的增殖抑制作用，并且呈时间和剂量依赖性，使细胞聚集在g0/

2、g1期,其机制涉及cox2依赖性途径。【关键词】塞来昔布；cox2；细胞增殖；鼻咽癌groacelllinee2bycelecoxibyifang1，2,xuxinhua1，2,fuxiangyang1，2,daidelan1，2,lidaojun1，2,zhangchangju31.departmentofoncology,centralhospitalofyichangcity,thefirstclinicalmedicalcollegeofthreegorgesuniversity,yichang443003,china;2.oncologyresea

3、rchinstituteofthreegorgesuniversity,3.medicalcollegeabstract：objectivetoinvestigatethegroacelllinee2treatedethodsthecellsurvivalrateeasuredbymttassay,thecellcycleandapoptosisetricmethod(fcm),theexpressionofcox2proteininecellstreatedethod.resultscelecoxibremarkablyinhibitedthegroorcells,o

4、nstratedinatimeanddosedependenteffect.thednacontentineachphaseofcellcyclehassignificantlychangedasfollobersing0~g1fractionincreasedsignificantly(from47.03%uptothehighestpercentageof79.20%),phaseofcellcycle.apparentlyapoptosistheresultofimmunochemistryspmethoditsuggestedthatcelecoxibdrama

5、ticallysuppressedtheexpressionofcox2ine2cells.conclusioncelecoxibeffectivelyinhibitedthegroorcellsulationoftumorcellsing0/g1phase.importantly,themechanismofantitumoreffectbycelecoxibmayincludecox2dependenta1材料与方法1.1主要试剂塞来昔布购于安徽合肥森瑞化工有限公司，rpmi1640培养基为美国gibco公司产品，小牛血清为杭州四季青产品，噻唑蓝(mtt)为美国

6、sigma公司进口分装，碘化丙啶(pi)购于sigma公司，鼠抗人cox2单克隆抗体为美国santacruz产品，sp超敏试剂盒和dab显色试剂盒均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。.133229.1.2细胞培养人鼻咽癌细胞株e2从中南大学湘雅医学院肿瘤研究所引进，培养在rpmi1640＋10%小牛血清＋双抗(青霉素100u/ml、链霉素100μg/ml)、37℃、5%co2中，每隔1～2d传代一次。1.3mtt法检测塞来昔布对e2细胞增殖活性的影响塞来昔布用95%的乙醇溶解，配成40mmol/l的储存液备用。取指数生长期细胞用0.25%胰酶消化，稀释成1×105/

7、ml，每孔200μl接种于96孔板并与下列浓度的药物共同培育：50、100、150μmol/l，对照组为含1ml/l乙醇的培养液。分别培养24h、48h和72h。培养结束后，每孔加mtt20μl，继续培养4h，弃上清，加二甲基亚砜150μl，震荡10min使mtt结晶完全溶解，酶联免疫检测分析仪测定492nm处吸光值(a492)，计算不同浓度下的抑制率。抑制率＝[(对照组a492-实验组a492)/对照组a492]×100%。1.4流式细胞术检测细胞周期和凋亡根据mtt结果计算得出24h的ic50值约为80μmol