血小板活化因子对气道平滑肌细胞的增殖及核因子nf

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1、血小板活化因子对气道平滑肌细胞的增殖及核因子NF：宋颖芳，李焕章，苏明权，吴昌归【关键词】,血小板活化因子　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectsofplateletactivatingfactor(PAF)ontheproliferationofratairoothmusclecells（ASMCs）andtheexpressionofnuclearfactorκB(NFκB).METHODS:MTTassayandfloetryulatedbyPAFinedbyelectrophoreticmobili

2、tyshiftassay(EMSA).TheeffectsofNacetylcysteine(NAC)onthefunctionofPAFol/L)stimulatedthecellproliferationandreacheditsmaximaleffectat1×10-7mol/L.Theproliferativeindex(PI)oftheASMCssignificantlyincreased（P<0.05）andtheNFκBactivityulationofPAF(10-7mol/L).NAC(20mmol/L)partlyin

3、hibitedthecellproliferationandtheincreasedNFκBactivityinducedbyPAF（P<0.05）.CONCLUSION:PAFcanstimulatetheproliferationofASMCs,aybeachievedpartlythroughtheactivationofNFκBpathoothmusclecell；nuclearfactorκB　　【摘要】目的：观察血小板活化因子(PAF)对离体培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的增殖及其核转录因子NFκB蛋白表达的影响.方法

4、：MTT法及流式细胞仪检测细胞周期，EMSA法检测PAF刺激后ASMCs中NFκB的活性改变；观察N乙酰半胱氨酸（NAC）干预对PAF作用的影响.结果：PAF在1×10-6～1×10-9mol/L范围内均能促进ASMCs的增殖(P<0.01)，且1×10-7mol/L时增殖作用最强，ASMCs细胞增殖指数明显增高（P<0.05），同时ASMCs细胞核内NFκB活性明显增加（P<0.01）.预先用20mmol/LNAC干预后，PAF的促增殖作用及核内NFκB活性均被明显抑制，但该抑制作用呈不完全抑制（P<0.05）.结论：

5、PAF能促进ASMCs的增殖,这一作用部分是通过激活NFκB通路而发挥的.　　【关键词】血小板活化因子；气道;平滑肌细胞；核因子NFκB　　0引言　　血小板活化因子(PAF)是一种强效的内源性磷脂类介质,对气道和肺血管功能起重要的调节作用,参与气道慢性炎症、肺动脉高压、气道高反应性、急性肺损伤等多种呼吸系统疾病的发生发展过程.近来研究发现PAF是NFκB激活的最直接、最近端的关键性调节剂［1］，直接参与NFκB的活化.NFκB在调节IL6，TNFα等炎性基因的表达及细胞增殖、凋亡中起重要的作用.但PAF对NFκB的活化是否与其对气道平滑肌细胞(

6、ASMCs)增殖的影响作用有关，尚需探讨.为此，我们检测了PAF对ASMCs增殖的影响及PAF刺激后ASMCs的NFκB活性改变.　　1材料和方法　　　1.1材料　　MTT，PAF，NAC（N乙酰半胱氨酸）、胰蛋白酶（Sigma公司）；Ⅳ型胶原酶、DMEM（Gibco公司）；胎牛血清（FCS，杭州四季青生物公司）；NEPERTM试剂盒（美国Pierce公司）；GelShiftAssay试剂盒（美国Promega公司）；γ32PATP（北京亚辉生物医学工程公司）；SD大鼠1只，雄性，体质量90g（第四军医大学实验动物中心）.流式细胞仪EPICSX

7、L（Coulter公司）.　　1.2方法　　1.2.1大鼠ASMCs培养及鉴定参照文献［2］的消化培养法获得.培养的ASMCs以形态特征及其抗αactinmAb对ASMCs进行免疫组化SABC法染色鉴定.取5～10代细胞（细胞纯度＞95％）用于实验.　　1.2.2MTT法检测不同条件下的ASMCs增殖活性取对数生长期ASMCs以7×103/孔接种于96孔培养板内，各浓度设8个复孔，37℃，50mL/LCO2孵箱内孵育12h使细胞贴壁，弃上清液，无血清DMEM液同步化24h后，将细胞分为3组，即PAF组、NAC组和对照组.PAF组加入含PAF及5

8、mL/LFCS的DMEM液，使PAF终浓度分别为1×10-6，1×10-7，1×10-8和1×10-9mol/L；NAC组在同步化2.5h时换用含20