健脾化瘀方对人肝癌细胞ras-mapk通路的影响

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1、健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/MAPK通路的影响健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/mapk通路的影响【关键词】健脾化瘀方；rtpcr；ras/mapk（声明：本站文章仅给需要的医务工提供交流学习参考。翰林医学免费提供。部分资源由工作人员X上搜索整理而成，如果您发现有哪部分资料侵害了您的，请速与我们后台工作人员联系，我们将即时删除。客服：88970242.后台工作：928333977）【】目的研究健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/mapk信号通路相关基因表达的影响。方法采用rtpcr法，用凝胶电泳分析系统比较目的基因与βactin基因的吸光度比值来反映基因的表达。结果e

2、rk、sos1、cfos基因表达降低(p＜0.05)，mek、raf、ras、grb2基因的表达未见明显差异(p＞0.05)。结论健脾化瘀方能通过抑制ras/mapk信号通路的上erk、sos1、cfos的表达，从而起到抑制肝癌细胞的生长，诱导细胞凋亡的作用。【关键词】健脾化瘀方；rtpcr；ras/mapkeffectofjianpihuayurecipeonras/mapkpathanhepatomacellzouxi,,nanjinguniversityoftcm,nanjingjiangsu,china210029)【abstract】objectiv

3、etostudytheeffectofjianpihuayurecipeonras/mapksignalingpathanhepatomacell.methodsthegeneexpressionethodandgelelectrophoresisanalysissystem.resultserk,sos1,cfosgeneexpressionek,raf,ras,grb2geneexpression.conclusionthejianpihuayurecipecaninhibitsthegroanhepatomacellandinducetheapoptosis

4、byinhibitingtheexpressionofgeneerk,sos1,cfosoftheras/mapksignalingpathapk细胞外刺激引起细胞反应是通过细胞内信号传导途径来实现的。.133229.mapk是一类特殊细胞信号传导蛋白，经上游激酶作用后发生苏氨酸、丝氨酸双位点磷酸化而激活［1］。是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者［2］，参与介导生长、发育、分裂、分化、死亡以及细胞间同步功能等多种细胞过程。该信号传导通路基本的信号传递步骤遵循mapks的三级酶促级联反应，该通路的激活可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡［3］。mapk信号转导通路

5、也被认为是许多信号通路的共同通道［4］。我们的前期实验研究表明，健脾化瘀方能明显抑制人肝癌细胞smmc7721的增殖，诱导人肝癌细胞的凋亡，因此，研究健脾化瘀方对人肝癌细胞ras/mapk信号通路相关基因表达的影响，是探索健脾化瘀方治疗肝癌机制的有效手段之一。本实验主要观察健脾化瘀方对ras/mapk信号传导通路上相关基因表达的影响。资料与方法1.细胞及药物人肝癌细胞株smmc7721由南京中医药大学细胞实验室提供。中药制备：黄芪10g、白术4g、苡仁10g、茵陈5g、半枝莲5g、重楼5g、丹参5g、郁金5g、白芍5g、全蝎1g，共55g，用550ml蒸馏水加热

6、回流提取2次，每次1小时，合并提取的药液，微波真空干燥。配制成相当于生药浓度1g/ml的药液灭菌备用，实验时配制为6mg/ml浓度。2.实验方法(1)细胞准备：取处于对数生长期的人肝癌细胞smmc7721，以5×105个/ml密度接种于直径6cm的培养皿中，37℃、5%co2培养箱中培养24h以使细胞贴壁，弃原培养液，加入健脾化瘀方终浓度为6mg/ml的含10%小牛血清的dmem培养液，继续培养48h后，用pbs洗2次，每皿加1mltrizol，反复吹打后收集细胞于ep管中。立即使用或-70℃保存待用。以对数生长期肝癌细胞smmc7721为对照。(2)rna制备

7、：每皿1mltrizol提取的细胞后，每ml加入200μl氯仿，静置10min后离心，取上清移至新ep管，加入等体积异丙醇，室温放置10min后离心，弃上清沉淀即总rna。每管加入1ml75%乙醇（用depc处理过的水配制），离心5min倒掉乙醇，室温晾干，加入20μldepc处理水，吹打混匀，随即使用或-70℃保存待用。(3)rna质量鉴定：取2μlrna加入500μldepc水中，在紫外分光光度仪上测定rna样品在260nm和280nm处的吸光度(od)值。od260与od280比值在1.8～2.0之间，表明无rna降解。2%琼脂糖凝胶40～60v预电泳10