尿毒清胶囊人含药血清抑制尿毒症毒素血清刺激的肾小管上皮细胞2增殖与转分化作用观察

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1、尿毒清胶囊人含药血清抑制尿毒症毒素血清刺激的肾小管上皮细胞2增殖与转分化作用观察作者：张秋林，汤水福，洪钦国【摘要】【目的】探讨尿毒清胶囊含药血清对人近端肾小管上皮细胞2＞增殖与转分化的影响。【方法】将体外培养的细胞分为组：正常对照组，体积分数毒症毒素血清组＜简称尿毒症血清组X体积分数It麻毒清胶囊含药血清组1简称含药血清组＞,蒙诺组1浓度为采用四氮唑蓝檲TO法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和a平滑肌肌动蛋白“SBX＞阳性细胞百分率。【结果】鷗M毒症血清组光吸收值＞显著高于正常对照组＜均P【关键词】尿毒清

2、胶囊f药理学■肾纤维化J中药疗法I血清药理学I细胞培养肾纤维化是各种肾脏疾病慢性进展到肾功能衰竭的共同病理机制，而以肾间质细胞外基质沉积为主要表现的肾间质纤维化过程是影响肾功能的重要因素1国。肾小管上皮细胞增殖、转分化在肾纤维化形成中占重要地位。尿毒症毒素血清能促进肾小管上皮细胞增殖及转分化己得到证实。益气升清、通腑泄浊法组方尿毒清胶囊对《/＜＞肾切除所致肾功能衰竭大鼠肾组织胶原沉积、转化生长因子Pl＜TCT31＞表达具有抑制作用OI，但对人肾间质纤维化中起重要作用的肾小管上皮细胞K2＞增殖、转分化的作用尚未明

3、了。本研究观察正常人的尿毒清胶囊含药血清对尿毒症毒素血清刺激的2增殖、转分化的影响，现将研宄结果报道如下。I材料与方法II主要试剂与仪器UWb4•培养基为美国CiIm公司产品，新生胎牛血清为杭州四季青生物材料工程有限公司产品，四氮哇蓝钃TT＞、二甲基亚砜*Kt〉、2Jf/L胰蛋白酶、碘化丙啶TO均为美国Sip*公司产品，蒙诺＜福辛普利＞原药粉为美国施贵宝医药公司产品，鼠抗人a平滑肌肌动蛋白USBTX＞一抗：5＜X、荧光素rXR标记山羊抗鼠□[＜二抗均为德国UlMei公司产品。V1CT型净化工作台为苏州净化设备厂

4、产品，■EmASNMD■型M2培养箱为美国IbHeEdMte-Ce公司产品，m型流式细胞仪为美国icCKBiCMLTEu公司产品，T22型紫外分光光度计为上海光学仪器厂产品，TSIH型倒置显微镜为日本公司产品，Bwtm型酶标仪为美国！＞ictwx产品培养条件采用MEIb4•培养基，临用前加体积分数2t漸生牛血清、■MI/iL青霉素、IHu9、AL链霉素。消化液为2»5，/1•胰蛋白酶。人近端肾小管上皮细胞和K2〉由中山大学医学院肾脏病研宄所余学清教授惠赠。I3血清制备I9I尿毒症毒素血清＜简称尿毒症血清＞收集血

5、清肌酐在之间，近期内无明显全身及局部感染，未接受过血液透析治疗的患者血清4•份，清晨空腹无菌静脉采血fcL，室温静置无菌条件下将全部血清混匀、灭活、抽滤分装，-2TC保存。同期收集正常人血清，收集方法同上尿毒清胶囊含药血清《简称含药血清：＞3名正常志愿者口服治疗剂量尿毒清胶囊后、最后I次服药后P均抽血5e«L，分离血清，并将含药血清置于WTC水浴箱Midi灭活、抽滤分装，-2TC保存。I4实验分组所有血清浓度均是体积分数。为保持培养基中血清浓度均为aez及根据预试验和文献设定尿毒症血清和尿毒清胶囊含药血清体积分

6、数分别为•Zo实验分组：＜O正常对照组：IT台牛血清加鷗/EE常人血清加助AT曲4•培养液。毒症血清组：鷗/胎牛血清加毒症血清加《常人血清和MIMEKi4«培养液。＜5＞»踩毒症血清组：It通台牛血清加lt

7、^毒症血清和助iMZIb4«培养液。＜4＞J踩毒清含药血清组：H船牛血清加J屁毒症血清加J传'药血清和助AHZIb4•培养液。《＞蒙诺组：■•齡牛血清加J脲毒症血清加常人血清加蒙诺1浓度为I•"biielZL）和MiMZIfc4•培养液。＜•＞鷗脲毒清含药血清组：《廟台牛血清加，踩毒症血清加》招•药血清和s

8、exkPBib4«培养液。增殖的检测121常规消化、收集细胞，每孔按IX个/iL接种于噍孔培养板，置ys°c、体积分数《€＞2培养箱内培养241，换成无血清培养液培养241使细胞处于静止期＜€•期：＞，分别接种于b组培养液中培养，每种浓度设3个复孔，实验重复2次。继续培养4V，每孔加2tul＜8；7L＞ITr溶液孵育41后弃除培养液，每孔滴加MStlHyL，振荡待紫蓝色结晶完全溶解，在4，i波长处，用酶标仪检测各孔光吸收嚳＞值。Ib流式细胞术＜*€■＞检测细胞周期及aSB^阳性细胞百分率各组《每组3瓶，实验重复

9、2次＞培养的细胞，继续培养犓卩后，消化、收集细胞，每管细胞数为IX

10、的个fiL，冷磷酸盐缓冲液靜》＞洗2次，体积分数T8/水乙醇固定，摇匀、吹打，4°C保存过夜，用于细胞周期检测。检测时离心，弃乙醇，》S洗■次，加染液（含MiS/LPX

11、f/LM.、IHis/L的如4°C避光染色Mi*，采用流式细胞仪检测。收集培养的细胞，用2•;、/!.多聚甲醛固定2«i*，MHb/iA,离心*‘，去