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1、高粱麸皮中酚类物质的快速溶剂萃取F.Barros*,L.Dykes,J.M.Awika,L.W.Rooney.JournalofCerealScience58(2013)305-312.材料与方法2.1高粱样品选取来自CollegeStation-Texas/2010的高单宁高粱和黑高粱(A05028/RTx3362)。之所以选取这两种高粱，是因为他们酚类物质含量高且差异大；高单宁高粱的主要酚类物质是，高分子量的原花色素，相反，黑高粱主要含有小分子量的酚类物质，例如3'-脱氧花青素。每次用PRL迷你去皮机(NutamaMachineCo.,Saskatoon,Canada）对1kg的高粱进
2、行剥壳，并用KICE谷类清洗器(Model6DT4-1,KICEIndustriesInc.,Wichita,KS)进行分离，从而得到麸皮。用UDY旋风研磨器(Model3010-030,UDYCorporation,FortCollins,CO)对麸皮（大概占原来谷物重量的10%）进行研磨并通过1.0mm的滤网过滤。产物置于-20℃保存。2.2试剂没食子酸，水和儿茶素，福-锡二氏试剂/Foline-Ciocalteu，乙醇胺，ABTS（（2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐），过硫酸钾，Trolox/水溶性维生素E（6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸），磷酸
3、钾，NaCl和柠檬酸均购于SigmaeAldrich(St.Louis,MO)。所有试剂都是高效液相色谱或是分析纯级别的。木犀草定氯化物，氯化芹菜定和7-甲氧基氯化芹菜定均来自于ALSACHIM(Strasbourg,France)。海沙购置于EMDMilliporeChemicals(Billerica,MA)2.3萃取方法使用装有溶剂控制器的戴安ASE快速溶剂萃取仪ASE200(DionexCorp.,Sunnyvale,CA)。不同温度下（60℃，120℃和150℃），各种试剂（50%和70%v/v乙醇/水，水和柠檬酸保存在pH2.5）进行检测。少量（0.5g）黑高粱和高单宁高粱麸皮
4、与30g沙子混合在22mL的萃取室中，每个萃取室的底部都放有，硝酸纤维素滤纸。装有样品混合物的萃取室，应预先填充萃取溶剂，随后密封加压，加热。ASE的各项参数设为压强（1500psi），一个萃取循环，冲洗体积/flushvolume（70%），氮清扫时间/nitrogenpurgetime（120s），静态时间/statictime（1min）和预加热时间（0min）。每个收集管，用去离子水定容到35mL。样品迅速离心8min，8000rpm。吸取悬浮液，-20℃保存在离心管中。传统的萃取方法（25℃/1atm）也是使用上述提到的试剂，我们用其来和ASE对比一下，萃取的效率。传统的（标准）
5、实验室萃取方法（1%HCl加入到甲醇中，70%丙酮/水）还可以和ASE来比较酚类物质的相对释放量。0.5g的高粱麸皮和35mL的溶剂混合在一起，混合物在室温（25℃），1atm下，低速震荡2h（VWRShakermodel3500,speed#4）。随后，萃取物，8000rpm离心8min。吸取悬浮液，-20℃保存在离心管中。2.4萃取物特性对采用ASE萃取法和传统萃取法，萃取出的物质，进行总的酚含量和抗氧化能力分析（等效抗氧化容量分析法/Trolox-equivalentantioxidantcapacityassay,TEAC)。用高效液相色谱法，对萃取物中的儿茶素，原花青素，3'-脱
6、氧花青素进行定量和识别分析。为了能够检测到萃取物质的产量，萃取物需进行冻干处理，产量用%w/w（冻干的萃取物的重量/麸皮重量）表示。2.4.1总酚和抗氧化能力用Dykes等（2005）改进过的福-锡二氏试剂法（Kaluzaetal.,1980）测量酸化甲醇萃取物中总酚的含量。用1.1mL的蒸馏水稀释0.1mL萃取物，随后和0.4mL的福林/Folin，0.9mL的0.5M乙醇胺反应。室温下，反应可持续20min，600nm下测吸光度。酚含量应计算和表示为mg没食子酸当量（GAE）/g样品（高粱麸皮）。用Awika等（2003）的等效抗氧化容量分析法（TEAC）在体外测量萃取物的抗氧化能力。
7、简要来说，等量的8mMABTS与3mM过硫酸钾需在暗处反应至少12h。ABTS工作液在734nm的原始吸光度应在1.5左右。0.1mL的水样加入到2.9mL的ABTS工作液中，室温下暗处反应30min。734nm下测吸光度。抗氧化能力应计算和表示为mmol当量抗氧化（Troloxequivalent，TE)/g样品（高粱麸皮）。2.4.2高效液相色谱分析使用装有二极管矩阵和荧光探测器的安捷伦1100/1200高效液相色谱
