新鲜烟叶中的酚类物质研究

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1、硕士学位论文新鲜烟叶中的酚类物质研究作者：沈丹红指导教师：王瑛副研究员许国旺研究员南京理工大学2014年1月Master．DissertationResearchonPhenolicCompoundsinFreshrn■T-lODaCC0LeaVeSDanhongShenSupervisedbyProf．HngWangNanjingUniversityofScience&TechnologyJanuary,2014声明本学位论文是我在导师的指导下取得的研究成果，尽我所知，在本学位论文中，除了加以标注和致谢的部分外，不

2、包含其他人已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得任何教育机构的学位或学历而使用过的材料。与我一同工作的同事对本学位论文做出的贡献均已在论文中作了明确的说明。研究生签名：j啦勿烨年弓月叫日学位论文使用授权声明南京理工大学有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可以向有关部门或机构送交并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容。对于保密论文，按保密的有关规定和程序处理。研究生签名：：丝么!之浏尸年乡月叫日硕士论文新鲜烟叶中的酚类物质研究摘要建立了烟叶中25种酚类

3、物质的高效液相色谱．紫#b／质谱(HPLC．UWMS)联合测定方法，其中11种主要酚类物质采用HPLC．UV法进行内标标准曲线法绝对定量分析，其余酚类物质采用HPLC．MS法进行内标校正半定量分析。HPLC．UV法以SymmetryC18色谱柱为固定相，流动相A为水／甲醇／7,酸(44／5／1，V／v／v)，B为甲醇／水／7,酸(44／5／1，v／v／v)，梯度洗脱，紫外检测波长为340nnl；I-tPLC．MS法以AgilentSB—AQ色谱柱为固定相，流动相A为O．1％乙酸水，B为乙腈，梯度洗脱，采用电喷雾电离四

4、级杆飞行时间质谱(ESI．Q．TOF)进行定性定量。方法验证结果表明：11种酚类标准物质在0．90-99．00pg／mL的范围内(绿原酸及芸香苷为0．95～380．00pg／mL)的线性相关系数在0．9993-0．9999之间。在22．5～24．8、45．0--49．5、67．5～74．3“g／mL3个水平的加标回收率为91．0‰112．4％。方法重复性的相对标准偏差在1．48％～13．40％之间，日内日间精密度的相对标准偏差为0．35％～15．54％。本方法已应用于批量烟叶样品检测。利用软件SIMCA-P11．5及

5、SPSS16．0对浓香型、清香型、中间香型94份成熟期新鲜烟叶样品中的酚类物质进行了数据分析，偏最dx-乘判别分析(PLS．DA)结果表明三种香型间有明显的分离趋势，其中浓香型与中间香型较接近，清香型独立分为一类；分层聚类(HCA)也得到相同的结果。两两香型通过非参数检验(p<0．05)结合PLS．DA模型的分类贡献值(VlP>1)得到不同香型间12种酚类差异代谢物。另外将酚类物质与各地的生育期气候条件做相关性分析，发现莨菪苷、芸香苷及芸香苷Ⅱ、山奈酚苷及山奈酚苷II与生育期气候显著相关(Pearson相关系数r>0

6、．6)。研究了贵州、云南、河南的红大、K326、中烟100三个品种不同生长阶段的197份新鲜烟叶样品中的酚类物质。讨论了遗传、环境、遗传与环境互作对酚类物质代谢累积的影响。由PLS．DA得分图及酚类物质含量随生育期变化曲线看出，同一产地不同品种间酚类物质生育期累积有所不同，同一品种不同产地间的差异更大，说明环境因素对酚类物质累积的影响大于遗传因素。建立了一种酚类物质用于代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量判别方法。将芸香苷与山奈酚苷含量的比值作为区分代谢组学合格样品、变质的不合格样品及部分变质的不合格样品的标准，即待测样

7、品中芸香苷与山奈酚苷含量的比值在6．4及以上的为合格样品，可用于代谢组学分析，在2．O以下的为变质的不合格样品，在2．0～6．4之间的为部分变质的不合格样品。用该方法判别了总共检测的350份样品，变质样品占8．28％，部分变质样品占6．86％，合格样品占84．86％。关键词：高效液相色谱．紫外厂质谱，新鲜烟叶，酚类，香型，生育期，质量判别Abstract硕士论文Twenty—fivephenoliccompoundsintobaccowereanalyzedusinghighperformanceliquidchro

8、matography-ultraviolet／massspectrometry(HPLC—UV／MS)，includingabsolutequantificationwithinternalstandardcurvemethodof1mainphenolsbyHPLC—UVandrelativequantificationwithinterna