正交试验结合药效学实验优选复方南星止痛膏处方提取工艺

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1、正交试验结合药效学实验优选复方南星止痛膏处方提取工艺　　[]目的：通过正交试验及镇痛抗炎实验探讨复方南星止痛膏处方最佳提取工艺。方法：采用正交试验法优选白芷、川芎等药材醇提工艺；采用鼠尾压痛及小鼠足趾肿胀药效学实验对丁香等药材中挥发油不同提取方法的提取物进行镇痛及抗炎作用对比，优选丁香等药材中挥发油的提取工艺。结果：复方南星止痛膏处方白芷、川芎等药材最佳醇提工艺为加入8倍量70%乙醇，提取2次，每次1.5h；丁香等药材95%醇提液对小鼠痛阈值的增大作用及小鼠足趾肿胀的抑制作用大于水蒸气蒸馏所得的挥发油及水煎液。结论：该法

2、简便、可靠，可为复方南星止痛膏现代制剂的开发提供技术参考。[关键词]复方南星止痛方；正交试验；欧前胡素；阿魏酸；鼠尾压痛实验；小鼠足趾肿胀实验；提取工艺[收稿日期]2012-10-30[基金项目]中药制药过程新技术国家重点实验室开放基金项目（SKL2010M0302）；北京中医药大学复方中药制药研究创新团队项目（2011-CXTD-13）；北京中医药大学自主选题项目（2011JYB22XS-063）[通信]*杜守颖，教授，博士生导师，主要从事中药新剂型与新技术研究，Tel：（010）84738615，E-mail：[em

3、ail protected][简介]黎迎，硕士研究生，E-mail：[email protected]复方南星止痛膏是一种传统的外用橡胶膏剂，由丁香、肉桂、白芷、川芎等中药组成，具有散寒除湿，活血止痛的作用。临床上用于寒湿瘀阻所致的关节疼痛，肿胀，活动不利，遇寒加重，舌质暗淡或瘀斑[1]。原工艺将处方中各味药以粉末形式制成橡胶膏剂，载样量小，成型性差，容易出现裂膏现象，皮肤顺应性差。有文献报道方中白芷药材所含的欧前胡素[2]，川芎药材所含的阿魏酸[3]，丁香[4]、乳香[5]、没药[5]等药材所含的挥

4、发油均有明显的镇痛抗炎作用。因此在复方南星止痛膏处方提取研究中，本文选择以欧前胡素及阿魏酸含量之和评分的方案，优化白芷、川芎等药材醇提工艺；对丁香等药材的95%乙醇提取液，水蒸气蒸馏所得挥发油及水煎液进行小鼠镇痛及抗炎作用对比，优选丁香等药材挥发油的最佳提取工艺。1材料LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司，SPD-20A，V小鼠，18～22g，雄性，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物批准号0251943，实验前适应性饲养一周。2方法与结果2.1工艺设计对方中白芷、川芎等药材进行乙醇回流提取，丁香等药材提取

5、其挥发油。通过正交试验及药效学实验对白芷、川芎等药材醇提工艺及丁香等药材挥发油的提取工艺进行考察。2.2欧前胡素、阿魏酸含量测定方法的建立2.2.1色谱条件MerckC18色谱柱（4.6mm250mm，5μm）；以甲醇（A）-1%醋酸溶液（B）为流动相，进行梯度洗脱，0～21min，30%A，21～22min，30%～62%A，22～60min，62%A，流速1mLmin-1；检测波长300，321nm；柱温30℃。对照品溶液和供试品溶液的色谱图见图1。1.阿魏酸；2.欧前胡素；a.300nm；b.321nm；A.

6、对照品；B.供试品。图1白芷、川芎等药材提取物的HPLC图Fig.1HPLCchromatogramsofmedicinalextracts2.2.2对照品溶液的配制精密称取欧前胡素对照品2.82mg，阿魏酸对照品2.65mg于25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1mL含欧前胡素113μg，阿魏酸106μg的对照品溶液。此为对照品原液，备用。精密吸取上述对照品原液1mL于5mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得每1mL含欧前胡素22.6μg，阿魏酸21.2μg的对照品溶液。2.2.3线性关系

7、的考察精密吸取2.2.2项下对照品溶液0.5，4，6，10，16，20，30μL注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积为横坐标，进样量（μg）为纵坐标进行曲线回归，阿魏酸、欧前胡素在0.0106～0.6360，0.0113～0.6770μg线性关系良好，线性方程分别为Y=125304X+12762（r=0.9999），Y=62065X+7844.7（r=0.9999）。2.2.4精密度试验精密吸取2.2.2项下对照品溶液10μL，重复进样6次，阿魏酸，欧前胡素峰面积的RSD分别为1.5%，0.8

8、9%，表明在此条件下仪器精密度良好。　　2.2.5稳定性试验取阿魏酸和欧前胡素对照品溶液按2.2.1项下条件分别于0，2，4，6，8，12，16，20，24h进样，阿魏酸和欧前胡素峰面积的RSD分别为1.4%，1.2%，表明对照品溶液在常温下24h稳定。2.3正交试验优化白芷、川芎等药材提取工艺选择乙醇浓度、溶剂倍数