猪苓菌核2种热激蛋白基因的克隆及其表达分析

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1、猪苓菌核2种热激蛋白基因的克隆及其表达分析　　[摘要]该研究采用RT-PCR技术从中国野生猪苓菌核Polyporusumbellatus中克隆得到2种热激蛋白基因，其中PuHsp90基因的开放阅读框2091bp，编码696个氨基酸，推导的蛋白质相对分子质量约78.9kDa；PuHsp70基因的开放阅读框1944bp，编码647个氨基酸，推导的蛋白质相对分子质量约70.5kDa；蛋白质结构预测及同源比对分析表明，这2个基因编码的核苷酸序分别具有Hsp90，Hsp70蛋白的保守结构域。进化树分析表明，PuHsp90与变色栓菌Hsp90聚

2、为一类，PuHsp70与肝色牛排菌Hsp70聚为一类。qRT-PCR分析表明，蜜环菌侵染的情况下，这2个基因在猪苓菌核中均上调表达。这2个基因在蜜环菌侵染猪苓菌核的状态下有相同的表达模式，预示这2个基因其可能在抗生物胁迫中起重要作用。　　[关键词]猪苓；热休克蛋白；基因克隆；表达分析　　[Abstract]WithRT-PCRapproaches，thefull-lengthcDNAoftwoheatshockproteingeneswereclonedfromtotalRNAofthePolyporusumbellatusscle

3、rotium.ThefullopenreadingframecDNAsequenceoftheHsp90was2091bp，encoding696aminoacidresidueswithapredictedmolecularmassof78.9kDa.ThefullopenreadingframecDNAsequenceoftheHsp70was1944bp，encoding647aminoacidresidueswithapredictedmolecularmassof70.5kDa.TheHsp90andHsp70protei

4、ncontainedtheconservativestructuredomain，respectively.PhylogeneticanalysisshowedthatHsp90andHsp90fromTrametesversicolorwereclusteredintoonegroup，Hsp70andHsp70fromFistulinahepaticawereclusteredintoonegroup.Real-timePCRanalysisshowedthat，theexpressionofHsp90andHsp70inthe

5、infectedpartbyAmillariellamelleawasupregulated.TheexpressionprofilingofHsp90andHsp70showedsamepatternsunderbioticstress.TheresultsindicatethatthesetwogenesmayplayanimportantroleinresponsetoAmillariellamelleainfection.　　[Keywords]Polyporusumbellatus；heatshockprotein；gen

6、eclone；geneexpression　　doi：10.4268/cjcmm20162411　　?峒さ鞍祝?heatshockproteins，简称Hsp）是在生物体遇到高温、高盐、干旱、营养缺乏、重金属离子等非生物胁迫下应激合成的蛋白，它的主要功能之一是通过与非蛋白质互相作用来预防未折叠蛋白变性和调节变性蛋白溶解复性[1-4]。温度变化是诱导Hsp合成的主要因子[5]。热休克蛋白广泛存在于从低等的原核生物到高等动植物各等种生物体内[6]，根据相对分子质量的不同，可将热激蛋白分为Hsp110s，Hsp90s，Hsp70s，Hsp

7、60s，小分子sHsps和泛素蛋白这6个家族[7]。其中，Hsp90蛋白可与其他分子伴侣共同调节参与各类非生物胁迫应激，如高热、干旱、高盐、有机物污染胁迫等[8]。Hsp70家族的功能研究的最为清楚，它参与了生物体的许多代谢调控[9]。有趣的是，Hsp70与植物抵抗病害关系密切。但是Hsp90与Hsp70在其他物种尤其是真菌中的功能研究报道迄今还很少。　　猪苓是我国重要的药用真菌资源，其菌核是有效的药用部位。猪苓菌核在生长过程中会与蜜环菌形成特殊的共生关系。蜜环菌菌索侵入猪苓菌核，为其提供生长发育所必须的营养元素。蜜环菌通过猪苓菌核

8、表皮侵染菌核时，菌核表皮下层的菌丝具有特异的拮抗性反应[10]。到目前为止，猪苓菌核的拮抗分子机制研究尚属空白。研究和揭示Hsp70及Hsp90基因在猪苓菌核抗逆反应中的作用，对猪苓菌核的防御反应分子机制的研究提供重要参考，同时对丰富